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大鼠游離甲狀腺素（fT4）elisa定量檢測試劑盒操作流程如下：

1.待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理

2.酶標板置4℃，包被過夜。

3.洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

4.陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 

5.酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。 

6.洗板，同（4）。 

7.每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 

8.酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。 

9.板，同（4）。 大鼠游離甲狀腺素（fT4）elisa定量檢測試劑盒

10.每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。 

11.每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。 

12.分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

13.數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。