公司φX174RF Ⅱ DNA30μg說(shuō)明書的RNA/DNA提取目錄有下面10個(gè)系列,5000余種產(chǎn)品:點(diǎn)擊了解更克隆及表達(dá)。
1、RNA純化系列產(chǎn)品
2、DNA純化系列產(chǎn)品
3、電泳及回收系列產(chǎn)品
4、探針標(biāo)記及檢測(cè)系列產(chǎn)品
5、核酸擴(kuò)增系列產(chǎn)品
6、克隆表達(dá)系列產(chǎn)品
7、基因組研究系列產(chǎn)品
8、蛋白質(zhì)研究系列產(chǎn)品
9、細(xì)胞生物學(xué)研究系列產(chǎn)品
10、即用型溶液、質(zhì)粒庫(kù)、菌種庫(kù)等等
φX174RF Ⅱ DNA30μg說(shuō)明書的詳細(xì)介紹:
DNA提取流程圖:
?問(wèn):常用的DNA 濃度及純度檢測(cè)方法有哪些?
φX174RF Ⅱ DNA30μg說(shuō)明書稱答:回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過(guò)對(duì)比定量的Marker 來(lái)定量濃度;紫外分光檢測(cè)OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說(shuō)明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時(shí)不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H 值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但不表示純度低。
問(wèn):長(zhǎng)片段回收時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題?
答:φX174RF Ⅱ DNA30μg說(shuō)明書當(dāng)DNA 段長(zhǎng)度較長(zhǎng)(5 kb 以上)時(shí),回收效率會(huì)有所下降,這是DNA 切膠回收時(shí)的常見現(xiàn)象。此時(shí)建議按以下方法解決問(wèn)題:
1 適當(dāng)增加待回收DNA 樣品的點(diǎn)樣量;
2 由于長(zhǎng)段DNA 不易從樹脂上洗脫下來(lái),建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過(guò)程中對(duì)長(zhǎng)段DNA 的物理?yè)p傷,如混合振蕩操作不要過(guò)于劇烈,切膠時(shí)不要將DNA 長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外等下。
注意事項(xiàng):
● φX174RF Ⅱ DNA30μg說(shuō)明書溶液PE *次使用前請(qǐng)按瓶上標(biāo)簽加入4 倍體積的無(wú)水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無(wú)水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無(wú)水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對(duì)電泳使用的Agarose 種類沒有嚴(yán)格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒有必要一定要使用低熔點(diǎn)的Agarose 等。
● 電泳時(shí)請(qǐng)使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)電泳時(shí)間,在條帶分離清晰后進(jìn)行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時(shí)應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強(qiáng)。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會(huì)偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應(yīng)等,不會(huì)影響后續(xù)試驗(yàn)。
● 為了保證回收效率,請(qǐng)不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作。
4,4'-雙(己氧基)氧化偶氮(>96.0%(N)) 4,4'-Bis(hexyloxy)azoxybenzene 2587-42-0 質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(N)
4,4'-雙(5-基-2-并惡唑基)芪(升華提)(>96.0%(HPLC)) 4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene (purified by sublimation) 2397-00-4 質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(HPLC)
4,4'-二正辛氧基氧化偶氮(>95.0%(N)) 4,4'-Di-n-octyloxyazoxybenzene 25729-12-8 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(N)
4,4'-二基二醚(>99.0%(GC)) 4,4'-Dinitrodiphenyl Ether 101-63-3 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
4,4'-二戊氧基氧化偶氮(>95.0%(N)) 4,4'-Diamyloxyazoxybenzene 19482-05-4 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(N)
4,4'-二羧基二醚(>98.0%(GC)(T)) 4,4'-Dicarboxydiphenyl Ether 2215-89-6 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)
4,4'-二壬氧基氧化偶氮 4,4'-Dinonyloxyazoxybenzene 25729-13-9 質(zhì)量規(guī)格:
4,4'-二羥基二醚(>98.0%(GC)) 4,4'-Dihydroxydiphenyl Ether 23994 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
4,4'-二羥基二酮(>98.0%(GC)(T)) 4,4'-Dihydroxybenzophenone 611-99-4 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)
4,4-二羥基二砜(>98%,BR) 4,4-Dihydroxydiphenyl sulfone 29465 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
4,4'-二二酮(>99.0%(GC)) 4,4'-Dichlorobenzophenone 90-98-2 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
4,4'-二二砜(>98.0%(GC)) 4,4'-Dichlorodiphenyl Sulfone 29411 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
4,4'-二氧基二酮(>99.0%(GC)) 4,4'-Dimethoxybenzophenone 90-96-0 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
4,4'-二氟二酮(>99.0%(GC)) 4,4'-Difluorobenzophenone 345-92-6 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC)
4,4'-二氧基氧化偶氮 4,4'-Dibutoxyazoxybenzene 17051-01-3 質(zhì)量規(guī)格:
4,4'-二氨基二醚(ODA)(標(biāo)準(zhǔn)品) 4,4′-Diaminodiphenyl ether 101-80-4 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
4,4'-二氨基二醚(標(biāo)準(zhǔn)品) 4,4'-Thiodianiline 139-65-1 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
4,4'-二氨基二酮(>98.0%(T)) 4,4'-Diaminobenzophenone 611-98-3 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)
4,4'-滴滴滴(標(biāo)準(zhǔn)品) p, p’-DDD 72-54-8 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
φX174RF Ⅱ DNA30μg說(shuō)明書5-Fluoro-2'-deoxycytidine規(guī)格:98%,進(jìn)分
5-Fluoro-1,3-dimethyluracil規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5'-Ethylcarboxamido-2',3'-isopropylideneAdenosine規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-Desthiolyl-5-thioxoCefoperazone規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-Desethyl5-CarboxyPioglitazone規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-Chloro-1,3-dimethyl-1H-pyrazole規(guī)格:>98%,*
5-Chloro-1,10-phenanthroline規(guī)格:>98.0%(T)
5-ChloroHydrochlorothiazide規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-Carboxy-X-rhodamine;5-ROX規(guī)格:>97%
5-CarboxyfluoresceinN-succinimidylester規(guī)格:0.9
實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)φX174RF Ⅱ DNA30μg說(shuō)明書實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量