問(wèn):常用的DNA 濃度及純度檢測(cè)方法有哪些?
lambda(λ)DNA5μg品牌稱(chēng)答:回收得到的DNA段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。瓊脂糖凝膠電泳通過(guò)對(duì)比定量的Marker 來(lái)定量濃度;紫外分光檢測(cè)OD260/280 比值,OD260/280 比值在1.7-1.9 之間說(shuō)明所得 DNA 純度較好,如果洗脫時(shí)不使用溶液Eluent而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)閜H 值和離子存在會(huì)影響光吸收值,但不表示純度低。
問(wèn):長(zhǎng)片段回收時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題?
答:lambda(λ)DNA5μg品牌當(dāng)DNA 段長(zhǎng)度較長(zhǎng)(5 kb 以上)時(shí),回收效率會(huì)有所下降,這是DNA 切膠回收時(shí)的常見(jiàn)現(xiàn)象。此時(shí)建議按以下方法解決問(wèn)題:
1 適當(dāng)增加待回收DNA 樣品的點(diǎn)樣量;
2 由于長(zhǎng)段DNA 不易從樹(shù)脂上洗脫下來(lái),建議洗脫兩次,可以提高洗脫效率;
3 減少操作過(guò)程中對(duì)長(zhǎng)段DNA 的物理?yè)p傷,如混合振蕩操作不要過(guò)于劇烈,切膠時(shí)不要將DNA 長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外等下。
lambda(λ)DNA5μg品牌的詳細(xì)介紹:
DNA提取流程圖:
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公司lambda(λ)DNA5μg品牌的RNA/DNA提取目錄有下面10個(gè)系列,5000余種產(chǎn)品:點(diǎn)擊了解更克隆及表達(dá)。
1、RNA純化系列產(chǎn)品
2、DNA純化系列產(chǎn)品
3、電泳及回收系列產(chǎn)品
4、探針標(biāo)記及檢測(cè)系列產(chǎn)品
5、核酸擴(kuò)增系列產(chǎn)品
6、克隆表達(dá)系列產(chǎn)品
7、基因組研究系列產(chǎn)品
8、蛋白質(zhì)研究系列產(chǎn)品
9、細(xì)胞生物學(xué)研究系列產(chǎn)品
10、即用型溶液、質(zhì)粒庫(kù)、菌種庫(kù)等等
實(shí)驗(yàn)步驟:
(1)lambda(λ)DNA5μg品牌實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::(25:24:1)抽提兩次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
注意事項(xiàng):
● lambda(λ)DNA5μg品牌溶液PE *次使用前請(qǐng)按瓶上標(biāo)簽加入4 倍體積的無(wú)水乙醇,即15 ml 溶液PE 中加入60 ml 無(wú)水乙醇,20 ml 溶液PE 中加入80 ml 無(wú)水乙醇,使用后立即蓋緊蓋子。
● 本產(chǎn)品對(duì)電泳使用的Agarose 種類(lèi)沒(méi)有嚴(yán)格限制,可以使用普通Agarose 。為了保證回收DNA 的質(zhì)量和DNA 回收效率,希望使用高純度的Agarose ,但沒(méi)有必要一定要使用低熔點(diǎn)的Agarose 等。
● 電泳時(shí)請(qǐng)使用新鮮配制的TAE 電泳緩沖液,以免影響電泳及回收效果。
● 請(qǐng)適當(dāng)延長(zhǎng)電泳時(shí)間,在條帶分離清晰后進(jìn)行切膠回收,以免回收到多余雜帶。
● 為提高DNA 回收收率,切膠時(shí)應(yīng)盡量除去多余的膠塊。
● 本試劑盒純化柱的DNA 吸附能力強(qiáng)。但如果DNA 濃度小,或DNA 初始量少,回收率將會(huì)偏低。
● 溶液Eluent(10 mM Tris-HCl, pH 8.5)中不含EDTA,其收集的DNA段可直接用于各種酶促反應(yīng)等,不會(huì)影響后續(xù)試驗(yàn)。
● 為了保證回收效率,請(qǐng)不要使用未調(diào)整pH 值的超純水洗脫目的段。
● 請(qǐng)嚴(yán)格按照操作步驟操作。
4'-基酮(>97.0%(GC)) 4'-Butylacetophenone 37920-25-5 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)
4-基醛(>95.0%(GC)) 4-Butylbenzaldehyde 1200-14-2 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)
4-基-4'-羥基查耳酮(>98.0%(HPLC)) 4-Butyl-4'-hydroxychalcone 385810-21-9 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)
4-差向土霉素 4-Epioxytetracycline 14206-58-7 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-差向-四環(huán)素-d6 4-epi-Tetracycline-d6 79-85-6 (unlabeled) 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-差向-四環(huán)素 4-Epi-Tetracycline 79-85-6 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-差向-地美環(huán)素 4-epi-Demeclocycline 14206-59-8 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-氧基醛(>97.0%(GC)) 4-Propoxybenzaldehyde 5736-85-6 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)
4-氧基二腈(>95.0%(GC)) 4-Propoxyphthalonitrile 106144-18-7 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)
4-表米諾環(huán)素 4-Epi Minocycline 43168-51-0 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)*
4'-芐氧基卡維地洛 4'-Benzyloxy Carvedilol 887352-95-6 質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
4-芐氧基醛(>98.0%(GC)) 4-Benzyloxybenzaldehyde 4397-53-9 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
4-酰-4'-基二醚(>98.0%(GC)) 4-Benzoyl 4'-Methyldiphenyl Sulfide 83846-85-9 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
4-酰-4'-基二醚(>98.0%(GC)) 4-Benzoyl 4'-Methyldiphenyl Sulfide 83846-85-9 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
4-基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(含氮量:23.50-24.30 %) 4-Phenyl-1,2,4-triazoline-3,5-dione 4233-33-4 質(zhì)量規(guī)格:含氮量:23.50-24.30 %
4-氨基鄰二腈(>98.0%(N)) 4-Aminophthalonitrile 56765-79-8 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(N)
4-氨基安替比林 4-Aminoantipyrine 30505 質(zhì)量規(guī)格:AR,分析純
4-氨基-5-咪唑酰 5-Amino-4-imidazolecarboxamide 360-97-4 質(zhì)量規(guī)格:>98%(滴定)
4-氨基-4'-二醚(>97.0%(GC)(T)) 4-Amino-4'-chlorodiphenyl Ether 101-79-1 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC)(T)
lambda(λ)DNA5μg品牌5-HydroxyRosiglitazone規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-HydroxyPropranololHydrochloride規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-HydroxyOmeprazoleSodiumSalt規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5'-HydroxyMeloxicam規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-HydroxyLornoxicam規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-HydroxyIndapamide規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-HydroxyDesloratadine規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-HydroxyDantrolene規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
5-HTP規(guī)格:≥98.0%,標(biāo)準(zhǔn)品,L構(gòu)型
5-HIAA規(guī)格:>98.0%,進(jìn)分