產(chǎn)品名稱 | 貨號 | A01X643 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | A375:A375 |
分類 | 人細胞系 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
商品介紹：
別稱 | A 375 |
種屬 | 人類 |
年齡（性別） | 女性，54歲 |
組織來源 | 皮膚；惡性黑色素瘤 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
詳情簡介 | A-375細胞源自一位54歲女性，是由D·J·Giard等人建立的一系列細胞株中的一株。A-375細胞在抗胸腺細胞球蛋白、血清處理的NIH瑞士小鼠中形成類似于惡性黑素瘤的快速增長的皮下腫瘤；A-375在普通成纖維細胞和瓊脂上形成克隆。 |
生物安全等級 | 1 |
生長培養(yǎng)基 | DMEM＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時間 | ~24-32小時 |
凍存條件 | |
凍存液 | 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO |
溫度 | 液氮 |
培養(yǎng)條件 | |
氣相 | 空氣，95%；CO2，5% |
溫度 | 37℃ |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細胞凍存注意事項：
(1) 細胞的收獲
用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿 90% 的時候，這時細胞生長狀態(tài)好，細胞數(shù)量也多，并且在收獲細胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細胞再重懸，活細胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細胞保存的最終細胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2) 保護劑的使用
細胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護劑。在細胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細胞特別是雜交瘤細胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細胞凍存的速率
細胞的冷凍速率最適控制在讓細胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導致細胞損害。對大多數(shù)細胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4) 儲存環(huán)境
細胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Rho鳥苷酸交換因子2重組兔單克隆抗體 英文名；GEF H1 結(jié)構(gòu)蛋白家族1抗體
RNA結(jié)合蛋白34抗體 英文名；RBM34 金屬磷酸酯酶1抗體
RNA聚合酶I抗體 英文名；UBF1 緊密連接蛋白7重組兔單克隆抗體
p53和DNA損傷調(diào)節(jié)蛋白1抗體 英文名；PDRG1 環(huán)指蛋白210抗體
Pacific Blue標記人CD15單克隆抗體 英文名；human CD15 (SSEA-1)/Pacific Blue 環(huán)指蛋白61抗體
Pacific Blue標記小鼠NK1.1單克隆抗體 英文名；mouse NK1.1/Pacific Blue 黃體激素釋放激素類似物抗體
PDZ連接激酶/T-LAK細胞源蛋白激酶抗體 英文名；PBK/TOPK 活化轉(zhuǎn)錄因子3抗體
PE-Cy5標記人CD62E/CD62P單克隆抗體 英文名；human CD62E/CD62P/PE-Cy5 肌動蛋白結(jié)合蛋白1抗體
PE-Cy5標記小鼠Ly-6G/Ly-6C單克隆抗體 英文名；mouse Ly-6G/Ly-6C/PE-Cy5 肌動蛋白樣蛋白6B抗體
PE-Cy7標記人CD71單克隆抗體 英文名；human CD71/PE-Cy7 肌球蛋白16/Myosin XVI抗體
PerCP-Cy5.5標記人CD127 (IL7R)單克隆抗體 英文名；human CD127 (IL7R)/PerCP-Cy5.5 肌球蛋白輕鏈激酶抗體
A375人惡性黑色素瘤細胞PerCP標記的腺苷A2b受體/神經(jīng)生長因子1受體抗體 英文名；ADORA2B, PerCP conjugated 肌微管素相關(guān)蛋白11抗體
PE標記人CD11c單克隆抗體 英文名；human CD11c/PE 雞新城疫血凝素抗體
磷酸化P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑抗體 英文名；phospho-CDKN1B (Thr157)
磷酸化Src原癌基因重組兔單克隆抗體 英文名；phospho-Src (Tyr419)
磷酸化氨基末端激酶1/2/3重組兔單克隆抗體 英文名；Phospho-JNK1/2/3(T183+T183+T221)
磷酸化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗體 英文名；phospho-KLF5 (Ser311)
操作步驟:
(1) 細胞系培養(yǎng)：取6cm細胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細胞所用的量)
A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細胞長滿之后，提取細胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達效率。
