產(chǎn)品名稱 | HCC1500 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 | 貨號(hào) | AXB6283 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | HCC1500 |
分類 | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動(dòng)物之臨床診斷或治療,僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):
(1) 細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時(shí)候,這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好,細(xì)胞數(shù)量也多,并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時(shí)方法和平時(shí)一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸,活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml ),加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對(duì)特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說,每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí),再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長(zhǎng)期保存。
(4) 儲(chǔ)存環(huán)境
細(xì)胞長(zhǎng)期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態(tài)層,因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮,需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
公司正在出售的產(chǎn)品:
Human trypsin ELISA Kit 人Multi-class aibodies規(guī)格: 48T
Ai-Mycoplasma Gallisepticum 雞毒支原體MG抗體Multi-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh IL-2R gamma/CD132 白介素2受體γ鏈抗體 規(guī)格 0.2ml
MYO/MB(Mouse Myoglobin) ELISA Kit 小鼠肌紅蛋白 96T
p73 alpha 英文名稱: p53相關(guān)蛋白P73α抗體 0.2ml
C2orf80 英文名稱: 2號(hào)染色體開放閱讀框80抗體 0.2ml
Ai-Mycoplasma Gallisepticum 雞毒支原體MG抗體Multi-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
MPO(Human myeloperoxidase) ELISA Kit 人髓過氧化物酶Multi-class aibodies規(guī)格: 48T
Ai-NRSF/REST 神經(jīng)元抑制蛋白抗體Multi-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh IFNGR1/CD119 干擾素-gamma受體1抗體 規(guī)格 0.1ml
IL-27(Mouse Ierleukin 27)ELISA Kit 小鼠白介素27 96T
p70 S6 kinase alpha 英文名稱: 核糖體p70 S6蛋白激酶抗體 0.1ml
C3orf37 英文名稱: 3號(hào)染色體開放閱讀框37抗體 0.2ml
Ai-NRSF/REST 神經(jīng)元抑制蛋白抗體Multi-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
ALP(Human alkaline phosphatase) ELISA Kit 人堿性0酸酶Multi-class aibodies規(guī)格: 48T
Ai-NGB 腦紅蛋白/神紅蛋白抗體Multi-class aibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus aibody Rh IL-20RB/IL-20R2 白介素20受體β鏈抗體 規(guī)格 0.2ml
ASA(Human Ai-Somatic Muscle Aibody) ELISA Kit 人抗骨骼肌抗體 96T
P70 Beta 2 英文名稱: 核糖體S6蛋白激酶β2抗體 0.1ml
CA I 英文名稱: 酶1抗體 0.2ml
Ai-NGB 腦紅蛋白/神紅蛋白抗體Multi-class aibodies規(guī)格: 0.1ml
IgH(Human immunoglobulin heavy chain) ELISA Kit 重鏈Multi-class aibodies規(guī)格: 48T
Ai-phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340) 0酸化原癌基因c-Raf抗體Multi-class aibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus aibody Rh HAGHL 羥基酰水解酶樣蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
HSP-40 ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白40 96T
HCC1500 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞p53R2 英文名稱: 核苷酸還原酶M2B抗體 0.1ml
BRCC4 英文名稱: 癌易感基因復(fù)合蛋白4抗體 0.2ml
Ai-phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340) 0酸化原癌基因c-Raf抗體Multi-class aibodies規(guī)格: 0.1ml
EHF(Human ai-epidemic hemorrhagic fever virus IgM aibody) ELISA Kit 人抗流行性出血熱病毒抗體IgMMulti-class aibodies規(guī)格: 48T
Ai-IRF7 干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體Multi-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus aibody Rh LGR4/GPR48 G蛋白偶聯(lián)受體48抗體 規(guī)格 0.1ml
Beta-CG(Human Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit 人絨毛膜激素β 96T
p53BP1 英文名稱: p53結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml
C11ORF67 英文名稱: 11號(hào)染色體開放閱讀框67抗體 0.2ml
Ai-IRF7 干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體Multi-class aibodies規(guī)格: 0.2ml
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng):取6cm細(xì)胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%,密度過大,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)
A液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染:把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時(shí),吸除無血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后,可在48h-72h細(xì)胞長(zhǎng)滿之后,提取細(xì)胞蛋白或者RNA,驗(yàn)證敲減/過表達(dá)效率。