操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | BJ-X97418 |
商品屬性：
名稱 小梁網(wǎng)細(xì)胞 2.組織來(lái)源：眼球 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 人小梁網(wǎng)細(xì)胞分離自眼球組織；小梁網(wǎng)由角膜基質(zhì)纖維、后界膜和角膜內(nèi)皮向后擴(kuò)展而成，覆蓋在鞏膜靜脈竇的內(nèi)側(cè)。小梁網(wǎng)細(xì)胞在眼內(nèi)壓調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用；小梁網(wǎng)細(xì)胞內(nèi)有特定的神經(jīng)遞質(zhì)和神經(jīng)肽受體，其中包括腎上腺素、乙酰和神經(jīng)肽Y。青光眼是由于眼內(nèi)壓力升高而造成的一種不可逆致盲眼病，小梁網(wǎng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)是青光眼病因?qū)W研究的重要手段之一。在小梁網(wǎng)細(xì)胞中，一長(zhǎng)串的血管活性多肽和生長(zhǎng)因子能夠觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制，小梁網(wǎng)細(xì)胞可合成不同類型的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白以及金屬蛋白酶。形態(tài)學(xué)觀察可見(jiàn)，剛從組織塊長(zhǎng)出的原代細(xì)胞，形態(tài)各異，多數(shù)呈星狀或不規(guī)則形。細(xì)胞有胞突，核橢圓形，胞體肥大，胞漿豐富，且可見(jiàn)吞噬顆粒。隨著細(xì)胞的增生及相互融合為單層，細(xì)胞的形態(tài)趨于一致。胞漿的色素顆粒及胞突消失，排列緊密呈類似上皮細(xì)胞的扁橢圓形或不規(guī)則形。胞體透亮，包膜清晰。 5.方法簡(jiǎn)介： ()實(shí)驗(yàn)室分離的人小梁網(wǎng)細(xì)胞采用組織貼塊法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： ()實(shí)驗(yàn)室分離的人小梁網(wǎng)細(xì)胞經(jīng)NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H132 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳1-2代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人反三碘甲狀腺原(rT3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
小鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
兔阿(ADR)免疫試劑盒*直銷
人血管緊張素Ⅱ受體1(ANGⅡR-1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
人趨化因子26(CCL26)免疫試劑盒*直銷
人抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)免疫試劑盒*直銷
人干擾素a-抗體(Anti-IFN-ab)免疫試劑盒*直銷
人β-防御素3 免疫試劑盒*直銷
犬雙氫睪酮(DHT)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
小梁網(wǎng)細(xì)胞Rhizoma bletillae白及探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周GNPAT 磷酸二羥丙酮?；D(zhuǎn)移抗體 規(guī)格: 0.2ml
Anaplasma marginale邊緣無(wú)漿體(無(wú)形體)LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周phospho-c-Abl(Tyr276) 磷酸化非受體酪激c-Abl抗體 0.1ml
Mycoplasma genitalium生殖支原體探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CK15 細(xì)胞角蛋白15抗體 0.1ml
Citrus Tristeza Virus(CTV)柑橘衰退病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-rabbit IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
Vesicular Stomatitis Virus Indiana Serotype(VSV-IND)水泡性口炎病毒印第安納型RT-LAMP劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周MGEA5 組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移抗體（腦膜瘤表達(dá)抗原5） 規(guī)格: 0.2ml
Rickettsia spp.立克次氏體通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 1-2周PANK2 泛酸激2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Hanzalova Virus漢扎洛瓦病毒探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Shigella tropina 志賀氏菌菌體蛋白抗體 規(guī)格: 1mlElongin B/TCEB2 轉(zhuǎn)錄延伸因子B2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Fructus chebulae訶子染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周YAP1 原基因Yes相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlFibrinogen gamma chain
Adenovirus(AV)腺病毒E型LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Goat Anti-human IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗人IgG 規(guī)格: 0.1mlMRP8+MRP14 多藥耐藥相關(guān)蛋白8/9/14抗體 規(guī)格: 0.2ml
Ehrlichiae spp.艾利希體屬（埃立克體屬）通用探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 1-2周PCDHGA1 原鈣粘蛋白γA1抗體 規(guī)格: 0.2mlIFITM1/CD225 干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1抗體 0.1ml
