操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
Hoechst 33258 | 10mg | FS-X9552 |
產(chǎn)品介紹:
本品Hoechst 33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,對(duì)細(xì)胞的毒性較低。 Hoechst 33258染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst 33258也常用于普通的細(xì)胞核染色,或常規(guī)的DNA染色。 Hoechst 33258的大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。 Hoechst 33258溶于水,溶解度可達(dá)10mg/ml。用于細(xì)胞核染色時(shí),推薦的Hoechst 33258工作濃度為0.5-10μg/ml。 :23491-45-4 分子式:C25H24N6O·3HCl 分子量:533.88 儲(chǔ)存條件:-20℃避光,有效期一年。 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
白介su12A(IL12A)檢測(cè)試劑盒 forInterleukin12A(IL12A)
半胱氨suan甘氨suan豐富蛋白1(CSRP1)檢測(cè)試劑盒 forCysteineAndGlycineRichProtein1(CSRP1) 前列腺suan性磷suanmei(ACP3)檢測(cè)試劑盒 forAcidPhosphatase3,Prostatic(ACP3)
彈性蛋白(ELN)檢測(cè)試劑盒 forElastin(ELN)
絲裂原激活蛋白激mei激mei激mei6(MAP3K6)檢測(cè)試劑盒 forMitogenActivatedProteinKinaseKinaseKinase6(MAP3K6)
親核suβ(KPNβ)檢測(cè)試劑盒 forKaryopherinBeta(KPNb1)
巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β(MIP3β)檢測(cè)試劑盒 forMacrophageInflammatoryProtein3Beta(MIP3b)
環(huán)磷suan腺(cAMP)檢測(cè)試劑盒 forCyclicAdenosineMonophosphate(cAMP)
血小板生成su(TPO)檢測(cè)試劑盒 forThrombopoietin(TPO)
補(bǔ)體成分1q子成分A(C1qA)檢測(cè)試劑盒 forComplementComponent1,QSubcomponentA(C1qA)
鈣蛋白mei3(CAPN3)檢測(cè)試劑盒 forCalpain3(CAPN3)
過(guò)氧化還原mei6(PRDX6)檢測(cè)試劑盒 forPeroxiredoxin6(PRDX6)
轉(zhuǎn)化受體電位陽(yáng)離子通道亞家族V成員1(TRPV1)檢測(cè)試劑盒 forTransientReceptorPotentialCationChannelSubfamilyV,Member1(TRPV1)
細(xì)胞周期suG2(CCNG2)檢測(cè)試劑盒 forCyclinG2(CCNG2)
TNF受體關(guān)聯(lián)因子3(TRAF3)檢測(cè)試劑盒 forTNFReceptorAssociatedFactor3(TRAF3)
皮膚T-細(xì)胞虜獲趨化因子(CTACK)檢測(cè)試劑盒 forCutaneousT-CellAttractingChemokine(CTACK)
和肽su(CPP)檢測(cè)試劑盒 forCopeptin(CPP)
Hoechst 33258細(xì)胞藍(lán)色熒光染料相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:50mg 英文名稱:
棕櫚油標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:1g 英文名稱:Palm Oil (AS)
石蠟標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:1g 英文名稱:Paraffin
磷脂標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:350mg 英文名稱:
維生suA、D標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:1g 英文名稱:Cod Liver Oil
ben扎lvan標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:5ml 英文名稱:
玉mi油標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:1g 英文名稱:Corn Oil (AS)
棉籽油標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:1g 英文名稱:Cottonseed Oil (AS)
橄欖油標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:1g 英文名稱:Olive Oil (AS)
碳suanan標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:2g 英文名稱:Ammonium Carbonate (AS)