產(chǎn)品介紹:
本產(chǎn)品為DAPI水溶液,濃度為1mg/ml。使用時(shí)根據(jù)實(shí)驗(yàn)不同直接將本產(chǎn)品用相應(yīng)溶液稀釋到工作濃度。 號(hào):28718-90-3 分子式:C16H15N5·2HCl 分子量:350.25 儲(chǔ)存條件:20℃避光保存,有效期至少2年 純度:≥90% (HPLC和 TLC) DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)是一種能夠與DNA中大部分A,T堿基相互結(jié)合的熒光染料﹐常用于熒光顯微鏡觀測(cè)。因?yàn)镈API可以透過(guò)完整的細(xì)胞膜﹐它可以用于活細(xì)胞和固定細(xì)胞的染色。當(dāng)DAPI與雙鏈DNA結(jié)合時(shí),大吸收波長(zhǎng)為358nm,大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。DAPI的發(fā)射光為藍(lán)色,且DAPI和綠色熒光蛋白GFP或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發(fā)射波長(zhǎng)僅有少部分重疊,可以利用這項(xiàng)特性在單一的樣品上進(jìn)行多重?zé)晒馊旧?/span> |
中文名稱:DAPI溶液(1mg/ml)
英文名稱:DAPI solution,1mg/ml
產(chǎn)品規(guī)格:1ml
貨號(hào):FS-X9669
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:HGF ELISA Kit,HGF,
發(fā)動(dòng)蛋白2(DNM2)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:DNM2 ELISA Kit,DNM2,
凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激meiI(ASK-1)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:ASK-1 ELISA Kit,ASK-1,
蛋白酪氨suan磷suanmei(PTP/PTPase/CD148)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:PTP/PTPase/CD148 ELISA Kit,PTP/PTPase/CD148,
單an氧化mei(MAO)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:MAO ELISA Kit,MAO,
雌二chun(E2)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:E2 ELISA Kit,E2,
補(bǔ)體因子D(CFD)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:CFD ELISA Kit,CFD,
表面膜免疫球蛋白A(mIgA)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:mIgA ELISA Kit,mIgA,
白介su增強(qiáng)子結(jié)合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:ILF2/NF45/PRO3063 ELISA Kit,ILF2/NF45/PRO3063,
卵巢癌抗原X1(OVX1)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:OVX1 ELISA Kit,OVX1,
酪氨酰tRNA合成mei(YARS)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:YARS ELISA Kit,YARS,
磷suan化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激mei(pERK)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:pERK ELISA Kit,pERK,
可溶性白細(xì)胞抗原G(sHLA-G)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:sHLA-G ELISA Kit,sHLA-G,
人抗血小板抗體IgG(PA-IgG)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:PA-IgG ELISA Kit,PA-IgG,
人抗凝血meiIII(AT III)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:AT III ELISA Kit,AT III,
人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:RNP-Ab ELISA Kit,RNP-Ab,
人抗BB抗體(BB-Ab)elisa檢測(cè)試劑盒 英文名稱:BB-Ab ELISA Kit,BB-Ab,
DAPI溶液(1mg/ml)二異丙酚相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:50mg 英文名稱:
鹽suan二jia雙胍相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:25mg 英文名稱:
鹽suanan碘tong標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Amiodarone Hydrochloride
美si那標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Mesna
奧利si他相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:10mg 英文名稱:
伊立替康相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:10mg 英文名稱:
二氫辣椒標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:25mg 英文名稱:Dihydrocapsaicin
替硝zuo標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Tinidazole
三氨喋啶相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:50mg 英文名稱:
氫溴suan加蘭他敏外消旋體標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:15mg 英文名稱: