參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：tNOS基因核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T  0.1PCR管
產(chǎn)品貨號：FS-P10717
產(chǎn)品分類：熒光探針法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物，內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標，作出標準曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
深海王祖農(nóng)菌培養(yǎng)基: 471海洋細菌水樣/上層海水提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

頭孢霉培養(yǎng)基: 14蟲草屬無性世代真菌研究。云南迪慶殼孢蟲草提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 15℃ 定期移植法

釀酒酵母淀粉發(fā)酵制酒精。模式菌株: no曲藥提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃

 -1474℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

漢氏葡糖醋桿菌培養(yǎng)基: 0001維生素C提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

枯草芽孢桿菌抑制棉花枯萎病原菌、抑制梨綠霉病原菌模式菌株: no露蜂房提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0003生長條件: 35-37℃

米曲霉大曲酒用。模式菌株: no酒曲提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃

嗜熱鏈球菌培養(yǎng)基: CM0044豆乳。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法

荷葉離褶傘培養(yǎng)基: 0014固體栽培提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃

釀酒酵母培養(yǎng)基: 0013生四個大孢子提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 -1475℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

ATCC10863=NRRLB-445=NCIB9282中國醬油的細菌酒曲；用于益生菌類保健食品。模式菌株: no種屬: Lactobacillus│rhamnosus提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0006生長條件: 37℃

 HBUM70196模式菌株: no安全等級: 1種屬: Streptomyces│sp.土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃

球形賴氨芽孢桿菌培養(yǎng)基: 0034遺傳工程; 限制性內(nèi)切酶Bsp提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 37℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

貝氏不動桿菌培養(yǎng)基: 820模式菌株: no沙土提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

大腸埃希菌用于科研模式菌株: no死亡雞提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37

絡緦rh-TNF-Alpha(rh-Tumor Necrosis Factor alpha)  重組人腫瘤壞死因子ZNF420  鋅指蛋白420抗體

絡塞定rh-TNF alpha protein GST Tagged  重組人腫瘤壞死因子ZNF415  鋅指蛋白415抗體

槐果堿TRA16  激素受體相關(guān)蛋白ZNF379/ZDHHC9  鋅指蛋白379抗體

花旗松素二氫槲皮素rh-IL-1Ra(Recombinant Human Interleukin-1 receptor antagonist His Tag)  重組人白介素-1受體拮抗劑ZNF364/BCA2/RNF115  癌相關(guān)基因2抗體（鋅指蛋白364）

槲皮素rhBMP-2/BMP2  重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2ZNF354C  鋅指蛋白354C抗體

槲皮苷rh-BMP-7/BMP7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7;rhBMP-7)  重組人骨形態(tài)發(fā)生蛋白7ZNF307  鋅指蛋白307抗體

標準品E.coli DH-5 Alpha(E.coli DH-5 Alpha Protein)  DH 5 alpha 大腸桿菌菌體蛋白ZNF300  鋅指蛋白300抗體

蒿甲Tranthyretin  甲狀腺素運載蛋白（抗原）ZNF288/ZBTB20  鋅指蛋白288抗體

姜黃素rh-EGF(Recombinant Epidermal growth factor)  重組人表皮生長因子ZNF268  鋅指脂蛋白抗體

去甲氧基姜黃素TrK A (h-NGFR) (p140- TrK A)  神經(jīng)生長因子的一種（抗原）ZNF268  鋅指脂蛋白-1c抗體
tNOS基因核酸檢測試劑盒Amorolfinehydrochloride　鹽阿莫羅芬/鹽阿莫洛芬（標準品）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(N)

AmpicillinSodium　氨芐西林鈉/氨芐青霉素鈉　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(N)

AmpicillinSodium　氨芐西林鈉(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

Amygdalin　扁桃苷/苦杏仁苷　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

Amygdalin　扁桃苷/苦杏仁苷(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

Anidulafungin　阿尼芬凈　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

AnsamitocinP-3　安絲菌素P-3（束絲放線菌）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

Aprepitant　阿瑞吡坦;阿瑞匹坦　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

Tenofovir　泰諾福韋;替諾福韋　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

Tenofovir　泰諾福韋;替諾福韋(標準品)　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

Aripiprazole　阿立哌唑　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

Aripiprazole　阿立哌唑（標準品）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

Ascomycin,FK520　子囊霉素　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

Ascomycin,FK520　子囊霉素（標準品）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

Atazanavir　阿扎那韋　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。