實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：植物內(nèi)源基因tRNALeu核酸檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：48T  0.1PCR管
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P10716
產(chǎn)品分類：熒光探針法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
定量PCR方法：
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。
DSM41451=IFO14750=JCM6307模式菌株: yes安全等級(jí): 1種屬: Streptomyces│thermolineatus堆肥提供形式: 凍干物模式菌株培養(yǎng)基: 0038

金黃色葡萄球菌用于科研模式菌株: no豬肝臟提供形式: 凍結(jié)物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37

 HBUM83954模式菌株: no安全等級(jí): 1種屬: Streptomyces│sp.土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃

AS3.25培養(yǎng)基: CM0077模式菌株: no種屬: Mucor│wutungkiao提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法

鮑曼/醋鈣復(fù)合不動(dòng)桿菌生長條件: 37℃培養(yǎng)基: CM0051提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no 真空冷凍干燥法

 -1472℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0013用于酒精提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法

米根霉培養(yǎng)基: CM0077釀造黃酒；產(chǎn)乳。提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；定期移植法

法夫擲孢酵母培養(yǎng)基: 0013模式菌株: no厚殼樹植物葉片提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長條件: 17℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

卵孢白僵菌生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0015提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法；礦物油法；定期移植法

鏈霉菌屬菌種雙功能酶抑制劑模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C

華癸中間根瘤菌主要用于研究質(zhì)粒之間的相互作用模式菌株: no分離自黃棕壤中生長的紫云英根瘤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 63生長條件: 28℃

 -1473℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

曲霉菌屬菌種抗金黃色葡萄球菌、大腸桿菌模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 25C

 NRRLY-1347培養(yǎng)基: CM0181模式菌株: no種屬: Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長條件: 28-30℃ -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

阿爾及利亞擬盤多毛孢培養(yǎng)基: 0014模式菌株: no木欖枝(內(nèi)生)提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法

黃芪甲苷黃芪皂苷IVCAP1/Park7/DJ-1  Park7/DJ-1/CAP1抗原ZNRF3  鋅指蛋白3/環(huán)指蛋白3抗體

黃芪皂苷ⅠCAP2(Adenylyl cyclase-associated protein 2)  環(huán)化酶相關(guān)蛋白CAP-2抗原ZNRF2  鋅指/環(huán)指蛋白2抗體

黃芪皂苷ⅡTGF beta 2 Propeptide  轉(zhuǎn)移生長因子–β2前體肽ZNRF1  鋅指/環(huán)指蛋白1抗體

黃芪皂苷ⅢTGF- Beta3 (Ttansforming Growth Factor – Beta3)  轉(zhuǎn)移生長因子–β3（抗原）ZNHIT1/CGBP1   周期蛋白1結(jié)合蛋白抗體

丁香酚TGF- Beta R2 peptide  轉(zhuǎn)移生長因子β受體2（多肽抗原）ZNF828/C13orf8  鋅指蛋白828抗體

黃楊堿環(huán)維黃楊星DThymosin Alpha-1  胸腺肽 α-1 （胸腺肽-Thymosin alpha-1）ZNF804A  鋅指蛋白804A抗體

標(biāo)準(zhǔn)品Caspase-12  半胱胺蛋白酶蛋白-12(多肽)ZNF693/Z1  鋅指蛋白693抗體

紅景天苷Caspase-12(hunman)  半胱胺蛋白酶蛋白-12抗原(人)ZNF474/ZFP106  鋅指蛋白474抗體

絡(luò)塞琳TmR2(GDNFR Beta；TRN-R；GFR-alpha-2；NTNR-2)  膠質(zhì)系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（多肽）ZNF471  鋅指蛋白471抗體

絡(luò)塞維TNF-Alpha(Tumor Necrosis Factor-Alpha)  人腫瘤壞死因子-α（多肽抗原）ZNF431  鋅指蛋白431抗體
植物內(nèi)源基因tRNALeu核酸檢測(cè)試劑盒Adapalene　阿達(dá)帕林(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)

Adefovir　阿德福韋　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)

Adefovir　阿德福韋(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)

alfacalcidol　阿爾法骨化醇　質(zhì)量規(guī)格：＞95.0%（HPLC）

PS48　PS48　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(N)

Alphalipoicacid　硫鋅　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T)

Alphalipoicacid　硫辛（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T)

AmbroxolHCl　鹽氨索　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T)

AmbroxolHCl　鹽氨索(標(biāo)準(zhǔn)品)　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T)

Amifostine　氨磷汀（三水）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T)

Bacitracin　桿菌肽　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T)

AmitriptylineHCl　鹽阿米替林　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T)

AmlodipineBesylate　磺氨地平（絡(luò)活喜、安洛地）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色譜標(biāo)記

AmlodipineBesylate　磺氨地平（標(biāo)準(zhǔn)品）　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC),BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

Amorolfinehydrochloride　鹽阿莫羅芬/鹽阿莫洛芬　質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(N)