產(chǎn)品名稱 | LU99C人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 | 貨號 | AXB6431 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | LU99C |
分類 | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項：
(1) 細(xì)胞的收獲
用來凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿 90% 的時候，這時細(xì)胞生長狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前 24 小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細(xì)胞開始時方法和平時一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細(xì)胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護(hù)劑在使用時先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對大多數(shù)細(xì)胞來說，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個小時，再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4) 儲存環(huán)境
細(xì)胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因為這樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Ai-Oxytetracycline/FITC 熒光素標(biāo)記土抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.2ml
Mouse Ai-rat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)小鼠抗大鼠IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.1ml
細(xì)胞角蛋白16抗體 Ai-CK16 0.1ml
Mouse Ai-Rabbit IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 0.1ml
Phospho-FLT3 (Tyr969) 英文名稱： 0酸化FMS樣酪酸激酶3 0.1ml
Rhesus aibody Rh PIWIL3 piwi樣3蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Mouse Ai-rat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)小鼠抗大鼠IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.1ml
Ai-P2P-R/RBBP6 /FITC 熒光素標(biāo)記增殖潛能相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.2ml
Mouse Ai-rat IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)小鼠抗大鼠IgMMulti-class aibodies規(guī)格： 0.1ml
細(xì)胞角蛋白19抗體 Ai-CK19 0.1ml
Mouse Ai-rat IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.1ml
Phospho-FLT3 (Tyr842) 英文名稱： 0酸化FMS樣酪酸激酶3 0.1ml
Rhesus aibody Rh Piwil2/Mili piwi樣2蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Mouse Ai-rat IgM/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)小鼠抗大鼠IgMMulti-class aibodies規(guī)格： 0.1ml
Ai-PAK1/FITC 熒光素標(biāo)記p21激活激酶1抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.2ml
Goat Ai-Mouse IgM 羊抗小鼠IgM (親和層析化)Multi-class aibodies規(guī)格： 1mg
促卵泡刺激素受體抗體 ai-FSH-R 0.2ml
Goat Ai-rabbit IgG/Cy5 Cy5標(biāo)記的羊抗兔IgG 0.1ml
Phospho-FLT3 (Tyr599) 英文名稱： 0酸化FMS樣酪酸激酶3抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh phospho-STAT1 (Ser727) 0酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子1抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Ai-Mouse IgM 羊抗小鼠IgM (親和層析化)Multi-class aibodies規(guī)格： 1mg
Ai-P2Y1 receptor/FITC 熒光素標(biāo)記P2Y1受體抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.2ml
Streptavidin/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素Multi-class aibodies規(guī)格： 0.1ml
酪激酶2抗體 Ai-CK2 0.1ml
LU99C人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞Rabbit Ai-mouse IgG/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 0.1ml
Phospho-FLT3 (Tyr589 + Tyr591) 英文名稱： 0酸化FMS樣酪酸激酶3 0.1ml
Rhesus aibody Rh PIWIL1/Miwi piwi樣1蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Streptavidin/HRP 辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈霉親和素Multi-class aibodies規(guī)格： 0.1ml
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)
A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長滿之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA，驗證敲減/過表達(dá)效率。
