產(chǎn)品名稱(chēng) | LUDLU-1人肺鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞 | 貨號(hào) | AXB6432 |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | 英文名 | LUDLU-1 |
分類(lèi) | 人細(xì)胞系 | 用途 | 僅供科研研究實(shí)驗(yàn) |
公司所有產(chǎn)品均不得用于人類(lèi)或動(dòng)物之臨床診斷或治療，僅可用于工業(yè)或科研等非醫(yī)療目的。
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng)：
(1) 細(xì)胞的收獲
用來(lái)凍存的細(xì)胞一般選擇在細(xì)胞約鋪滿(mǎn) 90% 的時(shí)候，這時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)好，細(xì)胞數(shù)量也多，并且在收獲細(xì)胞前 24 小時(shí)換一次培養(yǎng)液。收獲用來(lái)凍存的細(xì)胞開(kāi)始時(shí)方法和平時(shí)一樣，用 100xg 離心 5 分鐘收集細(xì)胞再重懸，活細(xì)胞記數(shù)。稀釋或濃縮到細(xì)胞保存的最終細(xì)胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬(wàn) 細(xì)胞 /ml )，加入已經(jīng)配好的等體積的培養(yǎng)液保護(hù)劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。
(2) 保護(hù)劑的使用
細(xì)胞凍存中， 一般使用DMSO 作為保護(hù)劑。在細(xì)胞凍存中， DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ，某種具體細(xì)胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對(duì)特別敏感的細(xì)胞特別是雜交瘤細(xì)胞在凍存時(shí)使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會(huì)好些。保護(hù)劑在使用時(shí)先用培養(yǎng)液或血清配成最終濃度的2倍，再與等體積的懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)液混合。
(3) 細(xì)胞凍存的速率
細(xì)胞的冷凍速率最適控制在讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間脫水而又不被過(guò)度脫水導(dǎo)致細(xì)胞損害。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細(xì)胞先在-20℃1-2個(gè)小時(shí)，再放入 -80℃冰箱過(guò)夜(如果沒(méi)有-80℃冰箱，可以用干冰替代)，再轉(zhuǎn)入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長(zhǎng)期保存。
(4) 儲(chǔ)存環(huán)境
細(xì)胞長(zhǎng)期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態(tài)層溫度在 -140℃至 -180℃之間，細(xì)胞可保存在氣態(tài)層或浸入液氮中，如果可能最好保存在氣態(tài)層，因?yàn)檫@樣可避免由于有液氮進(jìn)入凍存管而在拿出細(xì)胞時(shí)引起爆炸(但是這樣液氮罐內(nèi)只能存儲(chǔ)少量液氮，需要經(jīng)常添加)。細(xì)胞也可以在-80℃冰箱保存幾個(gè)月左右的時(shí)間。
公司正在出售的產(chǎn)品：
Ai-Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr421/Ser424) /FITC 熒光素標(biāo)記0酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.2ml
Goat Ai-human IgM 羊抗人IgM (親和層析化)Multi-class aibodies規(guī)格： 1mg
神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43 Ai-GAP-43 0.1ml
Donkey Ai-Goat IgG/Bio 標(biāo)記的驢抗羊IgG 0.1ml
phospho-FOXL2 (Ser263) 英文名稱(chēng)： 0酸化叉頭蛋白L2抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh phospho-SNAI2(Ser155+Ser158+Ser160+Tyr164+Tyr169) 0酸化鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體 規(guī)格 0.1ml
Goat Ai-human IgM 羊抗人IgM (親和層析化)Multi-class aibodies規(guī)格： 1mg
Ai-phospho-CaMK2a (pThr286)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化鈣/鈣調(diào)素依賴(lài)蛋白激酶2α抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Ai-Guinea IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗豚鼠IgG (10nm/15nm)Multi-class aibodies規(guī)格： 0.5ml
成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4抗體 Ai-FGFR4 0.1ml
Goat Ai-Mouse IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml
phospho-Fos B (Ser27) 英文名稱(chēng)： 0酸化癌基因FOS蛋白B抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh phospho-STAT6(Tyr641) 0酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Ai-Guinea IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗豚鼠IgG (10nm/15nm)Multi-class aibodies規(guī)格： 0.5ml
Ai-phospho-PAK2(pSer141)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化p21激活激酶2抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.2ml
Recomb Protein G/Gold 膠體金標(biāo)記重組蛋白G(10nm/15nm)Multi-class aibodies規(guī)格： 0.5ml
FoxP1抗體 ai-FoxP1 0.1ml
LUDLU-1人肺鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞Goat Ai-rabbit IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗兔IgG 0.1ml
phospho-FMRP (Ser500) 英文名稱(chēng)： 0酸化脆性X綜合征相關(guān)蛋白AFF1抗體 0.1ml
Rhesus aibody Rh phospho-STAT3 (Tyr705) 0酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3抗體 規(guī)格 0.1ml
Recomb Protein G/Gold 膠體金標(biāo)記重組蛋白G(10nm/15nm)Multi-class aibodies規(guī)格： 0.5ml
Ai-P2Y4 receptor/P2ry4 /FITC 熒光素標(biāo)記P2Y4受體抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.2ml
Rabbit Ai-Mink IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)兔抗水貂抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.1ml
細(xì)胞角蛋白4抗體 Ai-CK4 0.1ml
Mouse Ai-Rabbit IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 0.1ml
Phospho-FLT3(Tyr591) 英文名稱(chēng)： 0酸化FMS樣酪酸激酶3 0.1ml
Rhesus aibody Rh PITX3 炎癥因子3抗體(穿透素) 規(guī)格 0.2ml
Rabbit Ai-Mink IgG/HRP 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)兔抗水貂抗體IgGMulti-class aibodies規(guī)格： 0.1ml
操作步驟:
(1) 細(xì)胞系培養(yǎng)：取6cm細(xì)胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2培養(yǎng)密度至40%~60%，密度過(guò)大，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在EP管中制備以下兩液(為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)
A液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋1ug 質(zhì)粒DNA。
B液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋2ul脂質(zhì)體。
分別將A液與B液輕彈混勻，靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中，輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用1mL不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入4mL不含血清培養(yǎng)液。
(5) 轉(zhuǎn)染：把A/B復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃溫箱置6~24小時(shí)，吸除無(wú)血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(6) 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后，可在48h-72h細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)之后，提取細(xì)胞蛋白或者RNA，驗(yàn)證敲減/過(guò)表達(dá)效率。
