培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
中文名稱:Caspase 3抑制劑(Ac-DEVD-CHO)
英文名稱:Caspase 3 Inhibitor Ac-DEVD-CHO
產(chǎn)品規(guī)格:10mM×0.1ml|5mg
貨號:FS-X9546
產(chǎn)品介紹:
本品是一種非常強(qiáng)的Caspase 3抑制劑,可以抑制由Caspase3激活導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。也可以抑制Caspase 7。本品是一種可逆的Caspase 3抑制劑,也是常用的細(xì)胞凋亡抑制劑之一,常用于觀察特定的細(xì)胞凋亡是否通過Caspase 3激活來介導(dǎo)??梢杂糜谝种婆囵B(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的Caspase 3,也可用于抑制體外純化或粗抽提的Caspase 3。在體外對Casapse 3的IC50=200pM。本品10mM包裝產(chǎn)品配制在DMSO中,可以直接使用。5mg包裝為粉末裝。 分子式:C20H30N4O1 分子量:502.5 純度:>95%。 儲存條件:-20℃,有效期一年。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
踝蛋白(talin)elisa檢測試劑盒 英文名稱:talin ELISA Kit,talin,
過氧化物mei體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PPAR-γ ELISA Kit,PPAR-γ,
糖鏈抗原19-9(CA19-9)elisa檢測試劑盒 英文名稱:CA19-9 ELISA Kit,CA19-9,
水通道蛋白3(AQP-3)elisa檢測試劑盒 英文名稱:AQP-3 ELISA Kit,AQP-3,
羧化不全骨鈣su(ucOC)elisa檢測試劑盒 英文名稱:ucOC ELISA Kit,ucOC,
生長激su(HGH)elisa檢測試劑盒 英文名稱:HGH ELISA Kit,HGH,
神經(jīng)穿透su1(NPTX-1)elisa檢測試劑盒 英文名稱:NPTX-1 ELISA Kit,NPTX-1,
溶血補(bǔ)體(Hc)elisa檢測試劑盒 英文名稱:Hc ELISA Kit,Hc,
去jia(NA)elisa檢測試劑盒 英文名稱:NA ELISA Kit,NA,
前列腺suE2(PGE2)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PGE2 ELISA Kit,PGE2,
皮動蛋白(CTTN)elisa檢測試劑盒 英文名稱:CTTN ELISA Kit,CTTN,
尿激mei型纖溶mei原激活因子(uPA)elisa檢測試劑盒 英文名稱:uPA ELISA Kit,uPA,
腦紅蛋白(NGB)elisa檢測試劑盒 英文名稱:NGB ELISA Kit,NGB,
脂蛋白磷脂meiA2(Lp-PL-A2)elisa檢測試劑盒 英文名稱:Lp-PL-A2 ELISA Kit,Lp-PL-A2,
異質(zhì)性胞核核糖核蛋白P2(hnRNP P2)elisa檢測試劑盒 英文名稱:hnRNP P2 ELISA Kit,hnRNP P2,
載脂蛋白A1(apo-A1)elisa檢測試劑盒 英文名稱:apo-A1 ELISA Kit,apo-A1,
胰島su原(PI)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PI ELISA Kit,PI,
Caspase 3抑制劑(Ac-DEVD-CHO)糖suan莫mi松標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Mometasone Furoate
諾普利標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:300mg 英文名稱:Lisinopril
阿奇霉su標(biāo)準(zhǔn)品(定性用) 規(guī)格:75mg 英文名稱:Azithromycin Identity
維生suB2標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:500mg 英文名稱:Riboflavin (Vitamin B2)
鹽suan西替利嗪標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:250mg 英文名稱:Cetirizine Hydrochloride
碘代對ben二酚標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Iodoquinol
β-谷固chunβ-谷固chun標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:300mg 英文名稱:Beta-Sitosterol
jia潑尼龍標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Methylprednisolone
降糖靈標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Phenformin Hydrochloride
左旋異腎上腺su標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Levonordefrin
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)