RAPA3G動物組織直擴(kuò)PCR試劑盒
商品屬性：
產(chǎn)品分類 | 規(guī)格 | 貨號 |
PCR相關(guān) | 80T(50 μl 體系) | BJ-PJ6591 |
商品介紹：
RAPA3G DNA 聚合酶為經(jīng)電子重構(gòu)架的第三代 Taq DNA 聚合酶，第三代 DNA 聚合酶具有高度的雜質(zhì)耐受性、 長片段擴(kuò)增能力、高擴(kuò)增成功率、高產(chǎn)量，這些特點(diǎn)使得 RAPA3G 系列產(chǎn)品可用于粗制樣品的直接擴(kuò)增，無需核酸純 化步驟。該 PCR Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、5’-3’的外切 酶活性、3’-5’的外切酶活性，產(chǎn)物部分帶有"A“尾巴，部 分為平末端，因此產(chǎn)物可用于 TA 克隆或平端克隆。
特點(diǎn)和用途：
（1）高雜質(zhì)耐受性：該 PCR Mix 可直接使用血液、蛋白含量較高的動物組織材料進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，無需基因組提取。
（2）高效的快速 DNA 釋放劑：盡管該 PCR Mix 可以直接使用組織細(xì)胞材料進(jìn)行擴(kuò)增，但我們?nèi)匀煌扑]采用 DNA 釋放劑進(jìn)行樣本的快速前處理（約需要 5min，可高通量操作）。DNA 釋放劑的前處理，使得制備的 DNA 模板可以進(jìn)行多次、多基因擴(kuò)增，并長期保存 DNA，經(jīng) DNA 釋放劑處理的樣本，在室溫條件下放置 1 個月，無任何后續(xù)影響，-20 可長期保存。
（3）快速 PCR：該酶具有 6kb/min 以上的擴(kuò)增速度，可顯著的縮短 PCR 的擴(kuò)增時間，在常規(guī)測試條件下，10s 的延伸時間可完成 1kb 的基因組 DNA 擴(kuò)增。
（4）粗制樣品的擴(kuò)增能力：擴(kuò)增能力>4kb。
（5）高保真性能：該制品包含一定比例的 RAPA HiFi 超保真 DNA 聚合酶，因此其具有一定的保真性能（經(jīng)藍(lán)白斑測試，其保真性能約為 Taq DNA 聚合酶的 56 倍）。
（6）熱啟動，防止非特異性擴(kuò)增：RAPA3G 系列產(chǎn)品均采用 專有的熱啟動技術(shù)，確保 50 度以下無活性，僅有 95 度加熱 5min 以后才能恢復(fù)其活性，因此可最大限度的提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。
包裝：
2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 1ml×2
快速 DNA 釋放劑 A 20 ml
快速 DNA 釋放劑 B 20 ml
儲存：長期儲存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C（3 個月）保存。
使用方法
1. DNA 釋放
（1）采用加熱法：取 2-10 個毛發(fā)囊、1-10mg 動物組織等材料，放入到 0.2ml EP 管中，加入 50 μl 快速 DNA 釋放劑A，于 PCR 儀中 98°C 加熱 5min，加熱完畢后加入 50 μl快速 DNA 釋放劑 B，混合均勻，即可使用。
（2）采用鋼珠研磨法：取 1-10mg 動物組織等材料，放入到 2ml EP 管中，加入 250 μl 快速 DNA 釋放劑 A 和 2-3 粒鋼珠，研磨 1-2min 成漿體裝。研磨完畢后加入 250 μl 快速DNA 釋放劑 B，混合均勻，即可使用。
2. 按下表配制 PCR 反應(yīng)體系并混合均勻：
2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 25 μl
上游引物(10 μM) 2 μl
下游引物(10 μM) 2 μl
步驟 1 制備的模板 DNA 2 μl
ddH2O 19 μl
注意：當(dāng)擴(kuò)增片段>5kb 時，引物用量調(diào)整為 0.25-0.5μl。
3. PCR 擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)
循環(huán)數(shù) 溫度 時間
預(yù)變性 95°C 5min
25-40 Cycles
95°C 20s
50~60°C 20s
72°C 4-6kb/min
末延伸 72°C 2min
請注意：（1）該制品為熱啟動制品預(yù)變性步驟 5min 不可縮短，否則 DNA 聚合酶無法恢復(fù)活性。（2）當(dāng)擴(kuò)增片段<1kb時，延伸時間使用 15s；擴(kuò)增片段 1-2kb 時,延伸時間使用45s，擴(kuò)增片段 2-3kb 時,延伸時間使用 1min，當(dāng)擴(kuò)增片段>3kb 時，請按照 2kb/min 的延伸時間進(jìn)行設(shè)置。(3)盡管該酶具有 6kb/min 的延伸速度，但按照 2kb/min 設(shè)置延伸時間的條件下，能獲得最高的產(chǎn)量。
3. 注意事項：(1) 當(dāng)模板 GC 含量>70%時，請?zhí)砑?× Q-Solution。(2)當(dāng)采用全血、血漿等蛋白含量的樣本時，擴(kuò)增完畢后可能會有變性的蛋白沉淀，請離心后再進(jìn)行點(diǎn)樣和電泳。
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