操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái),吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng),未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
Caspase-9 Colorimetric Assay Kit | 20T|50T|100T | FS-X9578 |
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒適用于培養(yǎng)細(xì)胞及新鮮組織caspase-9 檢測(cè)。Caspase 家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起著非常重要的作用。Caspase-9 是級(jí)聯(lián)酶的上游分子,可被線粒體向細(xì)胞質(zhì)釋放的細(xì)胞色素 激活。激活的Caspase-9 可引起下游級(jí)聯(lián)酶的活性,如Caspase-3。Caspase-9 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,沒(méi)有活性;但在細(xì)胞發(fā)生凋亡階段時(shí)則被激活。Caspase-9 分光光度法檢測(cè)試劑盒就是將caspase-9 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團(tuán),當(dāng)該底物被caspase-9 剪切后,發(fā)色基團(tuán)即游離出來(lái),可通過(guò)酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)(λ=405nm 或400nm)測(cè)定其吸光值,可考察caspase-9 的活化程度。 注意事項(xiàng) 1. Caspase-9 Substrate 避光保存及使用。 2. 對(duì)某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細(xì)胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-9 活化的機(jī)制,這種情況時(shí)利用本試劑盒檢測(cè)Caspase-9 活性無(wú)明顯改變,需要考慮凋亡機(jī)制中的其他信號(hào)通路。 3. 細(xì)胞數(shù)量需達(dá)到3~5×106 個(gè)或新鮮組織50-100mg,以便能達(dá)到測(cè)定需要的100~200μg 蛋白的要求,因?yàn)镃aspase-9 的活性與細(xì)胞裂解液的蛋白含量有關(guān),如測(cè)定的OD 值偏低,可通過(guò)增加細(xì)胞數(shù)量或組織量的方法來(lái)提高蛋白量。 |
注意事項(xiàng):
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會(huì)影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會(huì)增加空白吸收,從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性,則測(cè)定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對(duì)較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定,對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè),MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
糖原合mei激mei3α(GSK3α)檢測(cè)試劑盒 forGlycogenSynthaseKinase3Alpha(GSK3a)
耳錨蛋白(OTOA)檢測(cè)試劑盒 forOtoancorin(OTOA)
Ⅱ型前膠原羧基端原肽(PⅡCP)檢測(cè)試劑盒 forProcollagenIIC-TerminalPropeptide(PIICP)
雌激su受體β(ERβ)檢測(cè)試劑盒 forEstrogenReceptorBeta(ERb)
DnaJ/Hsp40同源物亞家族C成員12(DNAJC12)檢測(cè)試劑盒 forDnaJ/HSP40HomologSubfamilyC,Member12(DNAJC12)
Anoctamin4蛋白(ANO4)檢測(cè)試劑盒 forAnoctamin4(ANO4)
輕肽鐵蛋白(FTL)檢測(cè)試劑盒 forFerritin,LightPolypeptide(FTL)
纖維膠凝蛋白1(FCN1)檢測(cè)試劑盒 forFicolin1(FCN1)
干擾suα17(IFNα17)檢測(cè)試劑盒 forInterferonAlpha17(IFNa17)
軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)檢測(cè)試劑盒 forCartilageOligomericMatrixProtein(COMP)
表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白D(SPD)檢測(cè)試劑盒 forSurfactantAssociatedProteinD(SPD)
降鈣su(CT)檢測(cè)試劑盒 forCalcitonin(CT)
輕肽鐵蛋白(FTL)檢測(cè)試劑盒 forFerritin,LightPolypeptide(FTL)
矢車(chē)菊α2(CENTα2)檢測(cè)試劑盒 forCentaurinAlpha2(CENTa2)
趨化因子C-X-C-基元受體3(CXCR3)檢測(cè)試劑盒 forChemokineC-X-C-MotifReceptor3(CXCR3)
白介su15(IL15)檢測(cè)試劑盒 forInterleukin15(IL15)
網(wǎng)狀蛋白3(RTN3)檢測(cè)試劑盒 forReticulon3(RTN3)
Caspase 9分光光度法檢測(cè)試劑盒氫溴suan右芬標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:500mg 英文名稱(chēng):
丙suan鈉標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng):Sodium Propionate
標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:100mg 英文名稱(chēng):Ipratropium Bromide
沙利鉑相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:15mg 英文名稱(chēng):
鹵貝他索丙suan酯標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng):Halobetasol Propionate
沙利鉑相關(guān)物質(zhì)F標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:25mg 英文名稱(chēng):
葡萄糖an鹽suan鹽標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng):Glucosamine Hydrochloride
克霉zuo相關(guān)雜質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:25mg 英文名稱(chēng):
雙羥標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng):Dicumarol
烏拉莫si汀標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:500mg 英文名稱(chēng):