產品屬性:
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Caspase 3 Assay Kit, Colorimetric | 20T | FS-X9628 |
產品介紹:
Caspase 3,即Cysteine-requiring Aspartate Protease 3,也稱CPP32、Yama或apopain,屬于Caspase家族的CED-3亞家族(CED-3 subfamily),系一種在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶,也是哺乳動物細胞中研究多的一個Caspase。 Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9,且可以直接特異性剪切多種Caspase底物,包括PARP(poly(ADP-ribose)polymerase)、ICAD(Inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease)、gelsolin和fodrin等。這些由Caspase 3介導的蛋白剪切是細胞凋亡分子機制的重要組成部分。另外,caspase 3在細胞核凋亡和細胞起泡(Cell blebbing)過程中也起到了關鍵作用,包括染色質固縮(chromatin condensention),DNA片段化(DNA fragmentation)等。 Caspase 3 Assay Kit, Colorimetric是一款簡單快速檢測細胞或組織內Casepase 3活性的試劑盒,其檢測原理是基于Casepase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)產生黃色的pNA(p-nitroaniline),pNA在405nm附近有強吸收,從而可以通過測定吸光度來檢測Caspase 3的活性(黃色產物與Caspase 3酶的活性成正比)。 另外,本試劑盒中還提供了Caspase 3催化產生的黃色產物pNA,以此作為定量caspase 3酶活性的標準品。 試劑盒組份: Lysis Buffer裂解液————8ml Assay Buffer檢測緩沖液——8ml Ac-DEVD-pNA(2mM)—————200μl pNA(10mM)————————200μl 儲存條件:-20℃ |
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。
γ-谷氨酰水解mei(γGH)elisa檢測試劑盒 英文名稱:γGH ELISA Kit,γGH,
YY1轉錄因子(YY1)elisa檢測試劑盒 英文名稱:YY1 ELISA Kit,YY1,
T-框蛋白6(TBX6)elisa檢測試劑盒 英文名稱:TBX6 ELISA Kit,TBX6,
Talpid3蛋白(Talpid3)elisa檢測試劑盒 英文名稱:Talpid3 ELISA Kit,Talpid3,
SHC-轉化蛋白2(SHC2)elisa檢測試劑盒 英文名稱:SHC2 ELISA Kit,SHC2,
RhoGDP解離抑制因子α(ARHGDIα)elisa檢測試劑盒 英文名稱:ARHGDIα ELISA Kit,ARHGDIα,
Piccolo蛋白(PCLO)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PCLO ELISA Kit,PCLO,
甘油激mei5(GK5)elisa檢測試劑盒 英文名稱:GK5 ELISA Kit,GK5,
封閉蛋白7(CLDN7)elisa檢測試劑盒 英文名稱:CLDN7 ELISA Kit,CLDN7,
鈣黏蛋白24(CDH24)elisa檢測試劑盒 英文名稱:CDH24 ELISA Kit,CDH24,
分揀連接蛋白10(SNX10)elisa檢測試劑盒 英文名稱:SNX10 ELISA Kit,SNX10,
防御suβ1(DEFβ1)elisa檢測試劑盒 英文名稱:DEFβ1 ELISA Kit,DEFβ1,
翻譯調節(jié)腫瘤蛋白1(TPT1)elisa檢測試劑盒 英文名稱:TPT1 ELISA Kit,TPT1,
耳蝶呤1(O)elisa檢測試劑盒 英文名稱:O ELISA Kit,O,
mei1(PON1)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PON1 ELISA Kit,PON1,
低氧上調節(jié)因子1(HYOU1)elisa檢測試劑盒 英文名稱:HYOU1 ELISA Kit,HYOU1,
蛋白二硫鍵異構mei(PDI)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PDI ELISA Kit,PDI,
Caspase 3活性檢測試劑盒(比色法)枸櫞suan奧芬那君標準品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Orphenadrine Citrate
羥考tong相關物質C標準品 規(guī)格:15mg 英文名稱:
相關物質B標準品 規(guī)格:50mg 英文名稱:
納tong標準品 規(guī)格:125mg 英文名稱:Naloxone
樟腦標準品 規(guī)格:1g 英文名稱:Camphor
福辛普利相關物質H標準品 規(guī)格:25mg 英文名稱:
利魯zuo相關物質A標準品 規(guī)格:25mg 英文名稱:Riluzole Related Compound A
標準品 規(guī)格:750mg 英文名稱:Lactulose
鹽suan二jia雙胍相關物質A標準品 規(guī)格:30mg 英文名稱:
姜黃su標準品 規(guī)格:30mg 英文名稱:Curcumin
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的*細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。