操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 |
TUNEL Apoptosis Detection Kit (Alexa Fluor 647) | 20 rxn | FS-X9626 |
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒應(yīng)用范圍廣,可以用于檢測冷凍或石蠟切片中的細(xì)胞凋亡情況,也可以檢測培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞的凋亡情況。 細(xì)胞在發(fā)生凋亡時,會激活一些DNA內(nèi)切酶,這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進行電泳檢測,可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。 TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling) 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(Alexa Fluor 647)可以用來檢測組織細(xì)胞在凋亡晚期過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況。其原理是在末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的作用下,在基因組DNA斷裂時暴露出的3′-羥基(3′-OH)末端摻入Alexa Fluor 647-12-dUTP,從而可以用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測。Alexa Fluor 647為紅色熒光染料,具有很高的穩(wěn)定性和很強的亮度。 試劑盒組份: 5×Equilibration Buffer——————————1.25 ml Alexa Fluor 647-12-dUTP Labeling Mix———100 μl Recombinant TdT Enzyme——————————20 μl Proteinase K(2 mg/ml)———————————40 μl 注意事項 1) 需自備用于洗滌細(xì)胞的PBS,用于封片的抗熒光淬滅封片液,用于固定的4%多聚。 2) 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。 儲存條件:-20℃,有效期一年。 |
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細(xì)胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養(yǎng)基,并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實驗情況而定,對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可,白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。
鞘磷脂(SM)elisa檢測試劑盒 英文名稱:SM ELISA Kit,SM,
葡萄糖激mei調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)elisa檢測試劑盒 英文名稱:GKRP ELISA Kit,GKRP,
Ⅷ(FⅧ)elisa檢測試劑盒 英文名稱:FⅧ ELISA Kit,F(xiàn)Ⅷ,
內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29(ERP29/C12orf8/ERP28)elisa檢測試劑盒 英文名稱:ERP29/C12orf8/ERP28 ELISA Kit,ERP29/C12orf8/ERP28,
膜聯(lián)蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)elisa檢測試劑盒 英文名稱:ANX-Ⅰ ELISA Kit,ANX-Ⅰ,
卵泡抑su樣蛋白1(FSTL-1)elisa檢測試劑盒 英文名稱:FSTL-1 ELISA Kit,F(xiàn)STL-1,
磷suan化乙酰輔meiA(PaCoA)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PaCoA ELISA Kit,PaCoA,
類白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)elisa檢測試劑盒 英文名稱:HLA-B27 ELISA Kit,HLA-B27,
游離三碘jia狀腺原氨suan(Free-T3)elisa檢測試劑盒 英文名稱:Free-T3 ELISA Kit,F(xiàn)ree-T3,
胰島su生長因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)elisa檢測試劑盒 英文名稱:IGF-Ⅱ ELISA Kit,IGF-Ⅱ,
異丙(iso-Hyd)elisa檢測試劑盒 英文名稱:iso-Hyd ELISA Kit,iso-Hyd,
血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PA-IgM ELISA Kit,PA-IgM,
血紅蛋白α亞基(HB-α)elisa檢測試劑盒 英文名稱:HB-α ELISA Kit,HB-α,
血管緊張suⅡ(ANG-Ⅱ)elisa檢測試劑盒 英文名稱:ANG-Ⅱ ELISA Kit,ANG-Ⅱ,
鋅指蛋白644(ZNF644)elisa檢測試劑盒 英文名稱:ZNF644 ELISA Kit,ZNF644,
纖溶mei原激活劑(PLGA)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PLGA ELISA Kit,PLGA,
細(xì)胞凋亡相關(guān)斑點樣蛋白(PYCARD)elisa檢測試劑盒 英文名稱:PYCARD ELISA Kit,PYCARD,
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(Alexa Fluor 647)1,6-脫水吡喃葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:50mg 英文名稱:1,6-anhydro-D-glucose
四碘熒光su鈉標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Erythrosine Sodium
鹽suan多巴酚丁an標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:600mg 英文名稱:Dobutamine Hydrochloride
碳suan鈉標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:1g 英文名稱:
瑞美松龍標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:100mg 英文名稱:Rimexolone
亞氨基二芐標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:25mg 英文名稱:Iminodibenzyl
相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:30mg 英文名稱:
大豆su標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:25mg 英文名稱:Daidzein
刺芒柄花su標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:50mg 英文名稱:Formononetin
標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱:Crotamiton