特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
自養(yǎng)無(wú)枝酸菌熒光定量PCR試劑盒探針法 | Amycolata autotrophica | 多種規(guī)格 | BJ-P9237 |
特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物,與相關(guān)病毒無(wú)交叉反應(yīng)。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測(cè),避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
儲(chǔ)存條件:-20℃以下,有效期12個(gè)月。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 | 三、注意事項(xiàng) 1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。 2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。 3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。 4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。 6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器 、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,不能混用;實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作;三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無(wú)核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4. 所有試劑在使用應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在一次使用應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器 擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
磷測(cè)試盒(帶標(biāo)準(zhǔn))比色法(磷鉬酸法) 100管/96樣 Phosphate Assay Kit10mL 抑制劑,10mg/mL Aprotinin Solution -20℃保存
鎂測(cè)試盒比色法 100管/96樣 Magnesium Assay Kit1瓶 EC-304細(xì)胞株 EC-304 低溫運(yùn)輸和保存
鈣測(cè)試盒(帶標(biāo)準(zhǔn))比色法(半自動(dòng)生化儀) 30管/25樣 Calcium Assay Kit含225ml 緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋 Buffered Peptone Water 10個(gè)/包
鉀測(cè)試盒(帶標(biāo)準(zhǔn))比濁法(手工) 30管/25樣 Potassium Assay Kit500 U 限制性內(nèi)切SacI Restriction Endonuclease -20℃保存
活性氧檢測(cè)試劑盒(ROS) 100T Reactive Oxygen Species Assay Kit50mL Potassium Acetate Solution(乙酸鉀溶液),3M Potassium Acetate Solution,3M 常溫保存
抑制與產(chǎn)生超氧陰離子自由基測(cè)試盒(比色法) 50T 100mg 遺傳(G418)干粉 G418 Sulfate (Geneticin) Powder 4℃避光保存
過氧化氫酶(CAT)測(cè)試盒 (可見光比色法) 100T 2 ug pProEX-Hta pProEX-Hta 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
乳酸(LD)測(cè)試盒(測(cè)全血) 48T 水楊苷發(fā)酵管 20支
乳酸(LD)測(cè)試盒(測(cè)血清、組織等) 48T 2 ug pCAMBIA1381Z pCAMBIA1381Z 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
乳酸脫氫酶測(cè)試盒(LDH) 24T|48T 25次 miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒 miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit -20℃保存
ATP酶測(cè)試盒(組織及細(xì)胞膜需高速離心) 50T 1g -3- 乙酸 IAA -20℃保存
自養(yǎng)無(wú)枝酸菌熒光定量PCR試劑盒探針法人 IFNA8 基因全長(zhǎng)ORF克隆犬腎上腺髓質(zhì)素(ADM)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
人 ICAM-1 / CD54 基因全長(zhǎng)ORF克隆犬腎上腺素(EPI)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人 GranzymeB 基因全長(zhǎng)ORF克隆犬神經(jīng)型一氧化氮合成(nNOS)免疫試劑盒*直銷
人 ICOS 基因全長(zhǎng)ORF克隆犬三碘甲狀腺原(T3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
人 SLPI 基因全長(zhǎng)ORF克隆犬軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
人 IFNαG 基因全長(zhǎng)ORF克隆犬熱休克蛋白70kDa蛋白1A(HSPA1A)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人 IFNA7 基因全長(zhǎng)ORF克隆犬熱休克蛋白70(HSP-70)免疫試劑盒*直銷
人 SLITRK1 基因全長(zhǎng)ORF克隆犬熱休克蛋白60,線粒體(HSPD1/Hsp-60)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
人 SMAC / Diablo 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆犬醛固酮(ALD)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
人 CD119 / IFNGR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆犬前列腺特異性抗原(PSA)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人 IFNα4 基因全長(zhǎng)ORF克隆犬前列腺素F2α(PGF2α)免疫試劑盒*直銷