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大鼠5-羥色胺elisa檢測試劑盒技術(shù)原理:

1. 抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。

2. 結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性。

3. 酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。

4. 受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。

5. 此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

6. 加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復(fù)性好。以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。

大鼠5羥色胺elisa檢測試劑盒操作時需注意事項(xiàng)：

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣

2.加樣：分別設(shè)空白孔空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl樣品終稀釋度為5倍。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將3048t的20倍倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048t的20倍倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑a50μl，再加入顯色劑b50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度od值。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。