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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | BJ-X97408 |
商品屬性：
名稱 大鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞 2.組織來源：骨髓 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。內(nèi)皮祖細(xì)胞是血管內(nèi)皮細(xì)胞的前體細(xì)胞，亦稱為成血管細(xì)胞（Angioblast），是一群具有游走特性，能進(jìn)一步增殖分化的幼稚內(nèi)皮細(xì)胞，缺乏成熟內(nèi)皮細(xì)胞的特征性表型，不能形成管腔樣結(jié)構(gòu)，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復(fù)。研究顯示，內(nèi)皮祖細(xì)胞在心腦血管疾病、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路，EPCs生物學(xué)特性和治療作用的研究成為這一領(lǐng)域新的熱點(diǎn)。 5.方法簡介： ()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞采用沖洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： ()實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞經(jīng)CD34免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號CM-R128 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)內(nèi)皮細(xì)胞樣 傳代特性可傳1-2代；不建議多次傳代 消化液0.25% 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
人剛地弓形蟲(T.gondii)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
雞白介素1β(IL-1β)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大鼠糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)免疫試劑盒*直銷
大鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)免疫試劑盒*直銷
駱駝轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
B 英文名稱：Polymyxin B 產(chǎn)品規(guī)格：2.25萬單位*5支
YPDA培養(yǎng)基 英文名稱：YPDA Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
TTC-沙保羅培養(yǎng)基 英文名稱：TTC-Sha Baoluo Medium 產(chǎn)品規(guī)格：250g
豬心?
大鼠骨髓來源內(nèi)皮祖細(xì)胞Xylohypha bantania木絲霉探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Goat Anti-Chicken IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml
Leptosphaeria maculans十字花科蔬菜黑脛病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周C22orf9 22號染色體開放閱讀框9抗體 規(guī)格: 0.2ml
Trichodysplasia Spinulosa Associated Polyomavirus(TSPyV) TS多瘤病毒LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CCDC112/MBC1 膀胱突變蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Paranavirus(PARV)帕臘南病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Prostatic Acid Phosphatase 前列酸性磷酸抗體 規(guī)格: 0.2ml
Simian Virus 5 (SV5)猴病毒5 染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周ANP32C 致瘤磷蛋白32相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Herba dianthi瞿麥染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周CD25/IL-2RA 白介素2受體a鏈抗體 IL-2Ra 規(guī)格: 0.1ml
Riemerella anatipestifer鴨疫里默氏桿LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/APC APC標(biāo)記的兔抗小鼠IgG-Fc 規(guī)格: 0.1ml
Salmonella pullorum雞白痢沙門氏探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周HER2/c-erbB2 HER2受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Cacumen platycladi側(cè)柏葉LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周TMED4 跨膜蛋白TMED4抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rift Valley Fever Virus(RVFV)裂谷熱病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周APIP/Apaf1 Interacting Protein 凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
