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產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | BJ-X97208 |
商品屬性：
名稱 兔肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞
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細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(DMEM-H:GIBCO,貨號(hào)12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二. 細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
兔子腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體受體3(TRAIL-R3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
人突觸泡蛋白(SYP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人抗心肌β1受體(MB1R)自身抗體免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
人對(duì)氧磷-3(PON3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
人B細(xì)胞生長(zhǎng)因子(BCGF)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
綿羊白介素8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝
大鼠纖維蛋白原β鏈(Fgb/Ab1-181/Ab1-216/Ac1-581)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
大鼠抵抗素樣α(Retnla)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝
鯽魚卵黃蛋白原(VTG)免疫試ows\system32\EhStorShell.dll
兔肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞Inhangapi病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周TRPM8 “冷”蛋白TRPM8抗體 規(guī)格: 0.2mlCTGFL 結(jié)締組織生因子樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Capillaria caudinflata平尾毛細(xì)線蟲探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周PNMT 苯乙醇胺甲基轉(zhuǎn)移抗體 規(guī)格: 0.2mlSIRT7 沉默調(diào)節(jié)樣蛋白SirT7抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rhizoma et radix notopterygii羌活探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周FRMD6 FRMD6蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlHNF4/TCF4/HNF4A 肝細(xì)胞核因子4α抗體 規(guī)格: 0.1ml
Afipia spp.阿菲波屬通用LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周LATS2 瘤抑制基因LATS2抗體 規(guī)格: 0.2mlMouse Anti-human IgM/Gold 膠體金標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 2ml
Bundibugyo Ebola Virus(BDBV)本迪布焦型埃博拉病毒探針?lè)晒舛縍T-PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Rabbit Anti-dog IgG/PE PE標(biāo)記的兔抗狗IgG 規(guī)格: 0.1mlRabbit Anti-pig IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗豬IgG 規(guī)格: 0.1ml
Herba artemisiae annuae青蒿探針?lè)≒CR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Calmodulin/CaM I 鈣調(diào)節(jié)素抗體（鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào)素） 規(guī)格: 0.1mlphospho-SIRT6(Ser338) 磷酸化沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白6抗體 規(guī)格: 0.1ml
Eperythrozoon suis豬附紅 體（豬嗜血支原體）PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用） 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周C16orf48 16號(hào)染色體開放閱讀框48抗體 規(guī)格: 0.2mlFBXL3 FBXL3蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
Encephalomyocarditis Virus(EMCV) 腦心肌炎病毒RT-LAMP試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周HDAC8 組蛋白去乙?；?抗體 規(guī)格: 0.2mlJMJD1B 組蛋白去甲基轉(zhuǎn)移JMJD1B抗體 規(guī)格: 0.1ml
Theileria uilenbergi尤氏泰勒蟲探針?lè)晒舛縋CR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(cè)（科研用）/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周CD21/EBV receptor 2型補(bǔ)體受體抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-MEK1/2(Ser222) 磷酸化絲裂原活化蛋白激激1/2抗體 規(guī)格: 0.1ml
Fructus jujubae大棗染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測(cè)試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Mouse Anti-human IgM/APC APC標(biāo)記的小鼠抗人IgM 規(guī)格: 0.1mlTIF1 beta/KAP1/TRIM28 轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1β抗體 規(guī)格: 0.1ml
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
