產(chǎn)品介紹:
用途: 細(xì)胞凋亡的生物化學(xué)分析,線粒體膜電位檢測 注意事項: 主要由JC-10染料儲存液,JC-10 buffer、CCCP等組成,可以檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位,采用FACS檢測。 儲存條件:-20℃,避光,12個月 |
中文名稱:線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-10法)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
貨號:FS-X9733
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
Tau蛋白(TAU)英文名:TAU 溴脫氧尿苷抗體包裝5g
Slit2(Slit2)英文名:Slit2 B遷移基因2抗體包裝1g
SCAF11蛋白(SFRS2IP/P11)英文名:SFRS2IP/P11 骨形態(tài)發(fā)生蛋白2抗體包裝250mg
S100鈣結(jié)合蛋白A8/A9復(fù)合物(S100A8/A9)英文名:S100A8/A9 骨形態(tài)發(fā)生蛋白7抗體包裝1g
S100蛋白(S-100)英文名:S-100 β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體包裝10MG
S100-B蛋白(S100B)英文名:S100B β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接抗體包裝250mg
S100B蛋白(S100B)英文名:S100B 癌易感基因2和p21蛋白抑制因子抗體包裝1g
RAR的相關(guān)孤獨受體C(RORC)英文名:RORC 血型抗原前體蛋白抗體包裝5g
Qa淋巴細(xì)胞抗原2(Qa-2)英文名:Qa-2 凱爾血型糖蛋白CD238抗體包裝1g
P選擇糖蛋白配體1(PSGL-1)英文名:PSGL-1 嗜乳脂蛋白亞家族2成員A2抗體包裝250mg
P選擇(P-Selectin/CD62P)英文名:P-Selectin/CD62P 骨形態(tài)發(fā)生蛋白10抗體包裝250mg
P物質(zhì)受體(SP-R)英文名:SP-R 溴脫氧尿苷單克抗體(增殖標(biāo)志物)包裝1g
P物質(zhì)(SP)英文名:SP BEND2蛋白抗體包裝25g
P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)英文名:P-gp 骨涎蛋白包裝5g
p53(p53)英文名:p53 副溶血性弧菌菌體鞭毛蛋白抗體包裝1g
血管緊張Ⅱ受體2抗體肝核因子1α(HNF1α)Capadenoson (BAY 68-4986) is a new adenosine A1 receptor agonist.
線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-10法)Salinicoccus alkaliphilus 4-氟-3,5二可溶性肝X受體
Pilidium concavum 5-氟-2-甲氧基-4-嘧啶可溶性共激分子4
金頂側(cè)耳(榆黃蘑) N-4-BOC-哌-2-乙酸甲酯可溶性核因子κB受體活化因子配基
褐球固氮 (R)-3-(甲基氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1
釀酒酵母 -3-乙酸甲酯可溶性瘦受體
竹喙球 6-溴-2-苯并噁唑酮可溶性髓系觸發(fā)受體-1
釀酒酵母 異鈮 w/v in isopropanol/hexane (50:50), 99% (metal可溶性糖蛋白130
粉肉色杯傘 2-[4-(2-吡啶基)芐基]-肼羧酸叔丁酯可溶性晚期糖基化終末產(chǎn)物受體
越南芽孢桿 3-溴-2-羥基-4-可溶性間粘附分子1
腸球?qū)?/span> 2-甲??扇苄孕剀占?
互生枝頂孢 3-甲可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1
解鳥拉烏爾 2-三氟甲氧基芐溴可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體
香菇 2-溴-1-(3,4-二甲氧基苯基)乙酮可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1
腐皮鐮孢 2-環(huán)戊基-2-羥基甲酯可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2
大腸埃希氏 2-氨基-4,5-雙(2-甲氧基乙氧基)鹽酸鹽可溶性血管內(nèi)皮粘附分子1