PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?/span>5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。

具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡(jiǎn)單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
1. 特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?/span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。

酸性藍(lán)29(>50%，Ind Grade)質(zhì)量規(guī)格：>50%，Ind GradeAcid blue 29  英文名稱MouseT3ELISAKit小鼠狀腺原氨酸(T3)規(guī)格：96T/48T  大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

7-(二氨基)-4-三氟(>97.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)7-(Dimethylamino)-4-(trifluoromethyl)coumarin  TOP10細(xì)菌1毫升  人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)試劑盒 Human VEGFR-2/Flk-1 ELISA kit

7-(二乙基氨基)-3-羧酸(>98.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)7-(Diethylamino)coumarin-3-carboxylic Acid  rabbitmaixmetalloproteinase9,MMP-9ELISA試劑盒兔子基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒 ，英文名： ssDNA ELISA Kit

6-[4-(二苯基氨基)苯基]-3-羧酸乙酯(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)Ethyl 6-[4-(Diphenylamino)phenyl]coumarin-3-carboxylate  小鼠白介素25(IL25)ELISA試劑盒 ，英文名： IL25 ELISA Kit  RatIerleukin4,IL-4ELISA試劑盒大鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
一葉秋堿 ，一葉萩堿Securinine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，對(duì)照品  小鼠原鈣黏素15(PCDH15)ELISA試劑盒 ，英文名： PCDH15 ELISA Kit  ELISAKitGH豬生長(zhǎng)激素規(guī)格：48T/96T

巖藻糖；L-巖藻糖L-(-)-Fucose 質(zhì)量規(guī)格：≥99%,BR  猴載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA檢測(cè)試劑盒MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 96T/48T  humaneosinophil-associatedribonucleaseAfamilymember2ELISAKit人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員2(EAR2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

果膠酶Pectinase質(zhì)量規(guī)格：3萬(wàn)U/g  犬基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)試劑盒 Canine Maix metalloproteinase 13,MMP-13 ELISA kit  人特異性β1糖蛋白(SP1/PSβ1-G)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

β-淀粉酶(70萬(wàn)u/ml液體)beta-Amylase質(zhì)量規(guī)格：BR,70萬(wàn)u/ml液體  英文名稱HumanAngiotensinIconveingenzymeELISAKit人血管緊張素I轉(zhuǎn)化酶(ACE)規(guī)格：96T/48T  小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)試劑盒 Mouse oxidized lowdensity lipoprotein,OxLDL ELISA Kit
大豆擬莖點(diǎn)種腐病菌PCR試劑盒電泳級(jí)SYBR Green I 10000X

DNA稀釋液

NP40 Lysis Buffer