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| 產(chǎn)品名稱 | Tuner(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10 |
| 包裝 | 100ul*10 |
| 分類 | 表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。
ICAM-1/CD54 人細(xì)胞間粘附分子1 規(guī)格： 48T/96T
CDC 人細(xì)胞分裂周期基因 規(guī)格： 48T/96T
CDC 人細(xì)胞分裂周期基因 規(guī)格： 48T/96T
CTLA-4/CD152 人細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4 規(guī)格： 48T/96T
CagA 人細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A 規(guī)格： 48T/96T
CTX 人細(xì)胞毒素 規(guī)格： 48T/96T
IAP 人細(xì)胞凋亡抑制因子 規(guī)格： 48T/96T
SLE 人系統(tǒng)性紅斑狼瘡 規(guī)格： 48T/96T
HEV-IgM 人戊型肝炎病毒IgM 規(guī)格： 48T/96T
HEV-IgG 人戊型肝炎病毒IgG 規(guī)格： 48T/96T
Pentosidine 人戊糖素 規(guī)格： 48T/96T
ACO-2 人烏頭酸酶2 規(guī)格： 48T/96T
GM 人胃粘液素 規(guī)格： 48T/96T
GIP 人胃抑素 規(guī)格： 48T/96T
GCA 人胃泌素細(xì)胞抗體 規(guī)格： 48T/96T
ProGRP 人胃泌素釋放肽前體 規(guī)格： 48T/96T
GRP 人胃泌素釋放多肽 規(guī)格： 48T/96T
Gastrin 人胃泌素 規(guī)格： 48T/96T
MTL 人胃動(dòng)素 規(guī)格： 48T/96T
PG-C 人*原C 規(guī)格： 48T/96T
PG-A 人*原A 規(guī)格： 48T/96T
Pepsin 人* 規(guī)格： 4
shēng huà shì jì 氯化鈷 容量： 25克
shēng huà shì jì 氯化鉻 容量： 1公斤
shēng huà shì jì 氯化鎘 容量： 500毫克
Tuner(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*10shēng huà shì jì 氯化鈣 容量： 500克
shēng huà shì jì 氯化鉍 容量： 100克
shēng huà shì jì 氯代十六烷 容量： 保存：-20℃ 250毫克
shēng huà shì jì 氯代磺酚C 容量： 500克
shēng huà shì jì 氯代癸烷 容量： 保存：-20℃ 1克
shēng huà shì jì 氯測(cè)試盒（帶標(biāo)準(zhǔn)） 容量： 10個(gè)
shēng huà shì jì 氯鉑酸鉀 容量： 保存：-20℃ 100毫克
shēng huà shì jì 氯鉑酸銨 容量： RT 25克
shēng huà shì jì 氯鉑酸 容量： RT，避光 25克
shēng huà shì jì 氯吡苯脲 容量： 100克
shēng huà shì jì 氯胺T 容量： 1克
shēng huà shì jì 綠色氧化鎳 容量： RT 5克
shēng huà shì jì 綠膿菌素測(cè)定用培養(yǎng)基 容量： 25克
shēng huà shì jì 綠膿菌色素測(cè)定用培養(yǎng)基 容量： 1米
shēng huà shì jì 鋁酸鈉 容量： 100克
shēng huà shì jì 鋁片 容量： RT 500克
shēng huà shì jì 鋁鎳合金 容量： 500克
8T/96T
注意事項(xiàng):
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。
