過氧化氫檢測試劑盒(熒光法)1000T使用說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
過氧化氫檢測試劑盒(熒光法)1000T使用說明書注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標(biāo)記時,盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
NCI-H358(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
腦成纖維細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CALR Others Human 人 CALR / Calreticulin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
Ramos細(xì)胞,血細(xì)胞瘤細(xì)胞系 615小鼠前胃癌瘤株,Fc細(xì)胞 人心臟成纖維細(xì)胞-心房裂解物HCF-aa L
豚鼠胚胎細(xì)胞;104C1
CFPAC-1(人胰腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0102Hep 3B(人肝癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小鼠腹水瘤細(xì)胞;S-180
CL-0084FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
FAS Others Rat 大鼠 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人腦血管平滑肌細(xì)胞裂解物HBVSMCL
HO-8910細(xì)胞,人卵巢癌細(xì)胞 小鼠淋巴結(jié)血管上皮樣細(xì)胞,SVEC4-10細(xì)胞 腎動脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
COLO 320DM(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
HNEpC Pellet 人鼻粘膜上皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人食道上皮細(xì)胞cDNAHEEpiC cDNA
ACVR1 Others Canine 狗 ALK-2 / ACVR1 / ALK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
人胚胎腸粘膜組織來源細(xì)胞;CCC-HIE-2
非洲綠猴腎細(xì)胞系/IgRCD4-;VERO/IgRCD4-
CW-2細(xì)胞,人結(jié)腸癌細(xì)胞 人黑色素瘤細(xì)胞,A875細(xì)胞 人急性早幼粒白血病細(xì)胞;HL-60
HCT-15(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
APCS Others Mouse 小鼠 APCS / SAP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)
小鼠含TCP1伴侶蛋白亞基2(CCT2)ELISA試劑盒 ,英文名: CCT2 ELISA Kit
人脫氧尿三磷酸(DUTP)ELISA檢測試劑盒Humandeoxyuridinetriphate,DUTPELISAKit 96T/48T
大鼠同型半*(Hcy)免疫試劑盒 Rat Homocysteic acid,Hcy ELISA Kit
英文名稱RatcarbonicanhydraseELISAKit大鼠碳酸酐酶(CA)規(guī)格:96T/48T
化妝品阿斯巴塘(aspartame)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitVEGF人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子規(guī)格:48T/96T
兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human thymus independent antigen (TI-Ag) ELISA Kit 人胸腺非依賴性抗原(TI-Ag)ELISA試劑盒
Humananti-centrolandcentrosomeantibody,ACAELISAKit 人抗中性粒/中心體抗體(ACA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanenkephalin,ENKELISA試劑盒人腦啡肽(ENK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織PKCζ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次
HumanParathyroidHormoneRelatedProtein,PTHrPELISAKit人甲狀腺素抗體(TAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
過氧化氫檢測試劑盒(熒光法)1000T使用說明書人*/苯丙酸去甲睪(NP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人苯丙酸(LPA)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人本周蛋白(BJP)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人保護(hù)素(CD59)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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