過氧化氫檢測(cè)試劑盒-熒光法100T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
過氧化氫檢測(cè)試劑盒-熒光法100T實(shí)驗(yàn)方法注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
(7)PI染色時(shí)間過長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
COLO 320DM(人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
人腦血管平滑肌細(xì)胞裂解物HBVSMCL
FAS Others Rat 大鼠 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
HO-8910細(xì)胞,人卵巢癌細(xì)胞 小鼠淋巴結(jié)血管上皮樣細(xì)胞,SVEC4-10細(xì)胞 腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
CL-0084FRhK-4(恒河猴胚腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
HNEpC Pellet 人鼻粘膜上皮細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人食道上皮細(xì)胞cDNAHEEpiC cDNA
犬腎細(xì)胞;MDCK(NBL-2)
GAD2 Others Mouse 小鼠 GAD65 / GAD2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
皮膚肥大細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
幼蚊細(xì)胞;C6/36 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤,PC-12細(xì)胞 HeLa 229(細(xì)胞)
人喉癌上皮細(xì)胞;Hep-2
PRMT6 Others Human 人 PRMT6 / HRMT1L6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
CFHR2 Others Human 人 CFHR2 / FHR2 / HFL3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
人外根殼細(xì)胞RNAHHORSC miRNA5 μg
人臍靜脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
BRL大鼠Buffalo細(xì)胞,大鼠肝細(xì)胞 SH-SY5Y(神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 人肺粘液上皮樣癌細(xì)胞;NCI-H292
CSF2 Protein Rat 重組大鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (His 標(biāo)簽)
T-24(人膀胱癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H5N1 (A/common magpie/Hong Kong/5052/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
大鼠纖溶抑制因子/*激活的纖溶抑制物(TAFI)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人胃粘膜相關(guān)淋巴樣組織淋巴瘤抗體(MALT Lymphoma Ab)免疫試劑盒 Human Mucosa-associated Lymphoid Tissue Lymphoma Antibody(MALT Lymphoma Ab)ELISA Kit
酸脫氫酶(PDH)測(cè)試盒 可見分光光度法 50管/48樣
RatPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISA試劑盒大鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInfluenzavirusesA,FLUAELISA試劑盒人流感病毒A(FLUA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Humanmelanocytestimulatinghormone,MSHELISAKit人黑色素細(xì)胞刺激素(MSH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat angiotensin I (Ang- I) ELISA Kit 大鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒
Humananti-doublestrandedDNA,dsDNAELISAKIT 人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanCyclin-dependentkinase1,CDK-1ELISA試劑盒人周期素依賴性激酶1(CDK-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織GRK4α激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次
HumanPrednisolone,PSELISAKit人*龍(PS)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
過氧化氫檢測(cè)試劑盒-熒光法100T實(shí)驗(yàn)方法人甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人甲狀腺球蛋白(TG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人甲狀腺抗體(TAb)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人甲狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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