乳酸酚棉藍染色液100ml使用說明書實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
乳酸酚棉藍染色液100ml使用說明書注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
S-180(小鼠肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
大耳山羊腎細胞;LDG-2
IFNA8 Others Human 人 Interferon alpha-B / IFNA8 人細胞裂解液 (陽性對照)
A549/DDP細胞,耐DDP肺癌細胞 中國倉鼠肺細胞,CHL細胞 CM-M002小鼠肺血管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
人生發(fā)基質(zhì)細胞HHGMC
Gibco 10639011 STEM PRO-34- COMBO 500ml
CM-R116大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞*培養(yǎng)基100mL
HA Others H9N2 甲型流感 H9N2 (A/Chicken/Hong Kong/G9/97) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠腎成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL
P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]小鼠骨髓瘤細胞 P3/NSI/1-Ag4-1 mouse myeloma cell line [NS-1] DMEM培養(yǎng)基+10%FBS
IL12A & IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白
UACC-812(人導管瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 EB-3 [EB3](人淋巴樣Burkitt淋巴瘤細胞)
IFNB1 Others Mouse 小鼠 IFNB1 / IFN-beta / Interferon beta 人細胞裂解液 (陽性對照)
人細胞;Hela 229 [HeLa229]
CRT 神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞
MHCC-97H人肝癌細胞(高轉(zhuǎn)移) MHCC-97H human hepatoma cells (high transfer) DMEM+10%FBS
TNFSF8 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (His 標簽)
人晶狀體上皮細胞 (HLEpiC)( 5×105 ) HUVEC-12, 人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞系 Human
小鼠含血管性血友病因子A域蛋白1(vWA1)ELISA試劑盒 ,英文名: vWA1 ELISA Kit
人協(xié)同刺激分子受體(CMR)ELISA檢測試劑盒Humancostimulatorymoleculesrecptor,CMRELISAKit 96T/48T
大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)免疫試劑盒 Rat Hya]uronate binding protein,HABP ELISA Kit
英文名稱RatHbA1cELISAKit大鼠糖化血紅蛋白(HbA1c)規(guī)格:96T/48T
化學發(fā)光免疫印跡消除試劑盒20次
ELISAKitVEGF-D人血管內(nèi)皮細胞生長因子D規(guī)格:48T/96T
小鼠基脲敏感性胺氧化酶(SSAO)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human advanced oxidation protein products (AOPP) ELISA Kit 人晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPP)ELISA試劑盒
Humanbonesialoprotein,BSPELISAKit 人骨涎蛋白(BSP)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanCathepsinAntibodies,CathAbELISA試劑盒人組織蛋白酶抗體(CathAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因油菜(canola)MS8品系基因檢測試劑盒20次
humansimilartoRIKENcDNA2010109K09geneELISAKit人類似RIKENcDNA2010109K09基因ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
乳酸酚棉藍染色液100ml使用說明書人肽基脯酰順反異構(gòu)酶(PPI)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人胎球蛋白A(FETU-A)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人胎盤生長因子(PLGF)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人胎盤泌乳素(PL)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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