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Caspase 3 活性檢測試劑盒-熒光100T使用說明書實驗操作步驟：
1、液的配制：
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ，其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推；對于細胞懸液每50～100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 （200×），按照每50μL JC-1（200×）加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液（5 ×），混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設置：
    把試劑盒中提供的CCCP（10mM ）*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中，稀釋至10uM ，處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ，進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數細胞，通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失，JC-1 染色后觀察應呈綠色熒光；而正常的細胞經JC-1 染色后應顯示紅色熒光。對于特定的細胞，CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同，需自行參考相關文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞：
（1）取 10～60 萬細胞，重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中，細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
（2）加入 0.5mL JC-1 染色工作液，顛倒數次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
（3）在孵育期間，按照每 1mL JC-1 染色緩沖液（5×）加入 4mL 蒸餾水的比例，配制適量的JC-1 染色緩沖液（1×），并放置于冰浴。
（4）37℃孵育結束后，600g 4 ℃離心3 ～4 分鐘，沉淀細胞。棄上清，注意盡量不要吸除細胞。
（5）用JC-1 染色緩沖液（1×）洗滌 2 次：加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液（1×）重懸細胞，600g 4 ℃離心 3～4 分鐘，沉淀細胞，棄上清。
（6）再用適量 JC-1 染色緩沖液（1×）重懸后，用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察，也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
Caspase 3 活性檢測試劑盒-熒光100T使用說明書注意事項
（1）本試劑只適用于實驗，不適用于臨床檢測；
（2）PI（propidium iodide，碘化丙錠）有毒性，能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用，使用時需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物質，在操作時請注意避光。在處理和標記時，盡可能在暗處進行。在孵育階段，用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后，在暗室內用顯微鏡觀察；
（4）整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作，以免影響細胞狀態(tài)。
（5）在細胞洗滌的后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留，有可能會影響實驗結果。
（6）為防止熒光衰變，宜在1小時內進行流式檢測。
（7）PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首*行Annexin V-FITC染色，短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
AAV-293(人胚腎細胞) 5×106cells/瓶×2

CL-0189Raji(人Burkitt's淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2

ACVR2B Others Cynomolgus 食蟹猴 ACVR2B / ACTRIIB 人細胞裂解液 (陽性對照)

Jurknt. Clone E6-1細胞，白血病細胞 急性T淋巴細胞白血病細胞,TALL-104細胞 人胰腺導管癌細胞;CFPAC-1

婆羅門牛皮膚成纖維樣細胞;BOS-3

PVRL2 Others Human 人 CD112 / Nectin-2 / PVRL2 人細胞裂解液 (陽性對照)
*中和液TNS

IL1RL1 Others Mouse 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細胞裂解液 (陽性對照)

人神經膠質細胞瘤細胞;U251

大鼠源細胞 Burkitt's 淋巴瘤細胞，NAMALWA細胞 LLC-MK2細胞，綠猴恒河猴腎細胞

Hela, 人細胞系 Human

ADIPOQ Others Mouse 小鼠 ADIPOQ / ACDC / Adiponectin 人細胞裂解液 (陽性對照)
CD70 Others Rat 大鼠 CD70 / CD27L / TNFSF7 人細胞裂解液 (陽性對照)

牛腎細胞;MDBK(BVDV-free)

人肺成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL

OCM-1細胞，人眼脈絡黑色素瘤細胞 繩狀青霉 小鼠T淋巴細胞瘤細胞;Cyc-Tag(S49)

ANGPTL5 Protein Human 重組人 ANGPTL5 蛋白 (GST 標簽)

Li-7(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 SARS冠狀病毒 Spike S1 Subunit 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照)
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