收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細(xì)胞株;(2)細(xì)胞株數(shù)量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮細(xì)胞株,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞試劑盒價(jià)格 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-963441 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
1025684-60-9 Resolvin D4 10μg Rhizoma atractylodis macrocephalae 白術(shù)染料法PCR鑒定試劑盒
1025684-60-9 Resolvin D4 25μg Rhizoma atractylodis macrocephalae 白術(shù)染料法PCR鑒定試劑盒
1025684-60-9 Resolvin D4 50μg Radix angelicae dahuricae白芷染料法PCR鑒定試劑盒
1025684-60-9 Resolvin D4 100μg Radix angelicae dahuricae白芷染料法PCR鑒定試劑盒
1025687-58-4 R788 disodium 5mg Cortex dictamni白鮮皮染料法PCR鑒定試劑盒
Tenuifoliside A 中文名:遠(yuǎn)志蔗糖酯A 分子式:C31H38O17 度:95.0% 兔子內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)ELISAKit ELISA. 96T/48T
3,3-Dimethylacrylic acid 中文名:千里光酸 分子式:C5H8O2 度:98.0% 兔子膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Campsiketalin 中文名: 分子式:C10H20O4 度:95.0% 兔子內(nèi)皮抑素elisa試劑盒 兔子內(nèi)皮抑素試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔子內(nèi)皮抑素試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子內(nèi)皮抑素試劑盒、兔子內(nèi)皮抑素elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
Macranthoin G 中文名:灰氈毛忍冬素G 分子式:C26H26O12 度:97.0% 兔子甲狀腺素elisa試劑盒 兔子甲狀腺素試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔子甲狀腺素試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子甲狀腺素試劑盒、兔子甲狀腺素elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
5-O-Ethylcleroindicin D 中文名: 分子式:C10H16O4 度:% 兔子凝血因子Ⅱelisa試劑盒 兔子凝血因子Ⅱ試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔子凝血因子Ⅱ試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔子凝血因子Ⅱ試劑盒、兔子凝血因子Ⅱ elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
大鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞試劑盒價(jià)格1047980-83-5 MRS 2768 tetrasodium salt 1mg Diarrheagenic Escherichia coli致瀉性大腸桿菌(致瀉性大腸埃希氏菌)通用LAMP試劑盒,停 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒
1048007-93-7 Masitinib mesylate 100mg Trichodysplasia Spinulosa Associated Polyomavirus(TSPyV) TS多瘤病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒
1048007-93-7 Masitinib mesylate 10mg Diarrheagenic Escherichia coli致瀉性大腸桿菌(致瀉性大腸埃希氏菌)通用LAMP試劑盒,停 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒
1048007-93-7 Masitinib mesylate 10mM*1mLinDMSO Trichodysplasia Spinulosa Associated Polyomavirus(TSPyV) TS多瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒
1048007-93-7 Masitinib mesylate 200mg Trichodysplasia Spinulosa Associated Polyomavirus(TSPyV) TS多瘤病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 動(dòng)物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒