實(shí)驗(yàn)操作步驟： 
a．采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞嚙齒動(dòng)物。   
b．立即在無菌超凈臺(tái)內(nèi)用70％乙醇擦洗整個(gè)動(dòng)物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

公司向您推薦大鼠食管上皮細(xì)胞的詳細(xì)說明：

產(chǎn)品描述：提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

      發(fā)貨：客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度?？萍继峁┑募?xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程，保證細(xì)胞的純度在90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基；2、說明書及注意事項(xiàng)；3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。

      保存和應(yīng)用：客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞，如是新鮮原代細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h，再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞，客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)：
用于檢測(cè)細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10％小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)對(duì)細(xì)胞因子有依賴性的細(xì)胞株時(shí)還有加入適量細(xì)胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長特性，在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候進(jìn)行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細(xì)胞的傳代：
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液，用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細(xì)胞，一般按1：2-1：5 稀釋細(xì)胞后，分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
?
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)； 人皮膚成纖維細(xì)胞,CCC-HSF-1細(xì)胞
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；

無菌鹽水虎杖苷 98%muller-kaufmann氏四硫磺酸鈉肉湯pUNO1-hCx26

無菌鹽水貝母素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，>98%抗生素檢定培養(yǎng)基6號(hào)（PH7.2-7.4）pUNO1-hCx32

胰蛋白胨大豆肉湯TSB鹽酸巴馬汀 分析標(biāo)準(zhǔn)品含糖牛肉湯培養(yǎng)基pUNO1-hCX3CR1a

10%胰蛋白胨大豆肉湯人參三醇 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98石蕊牛奶培養(yǎng)基pUNO1-hCX3CR1b

20%胰蛋白胨大豆肉湯原阿片堿   98%乳酸桿菌選擇性肉湯pUNO1-hCx43

培養(yǎng)基葛根素 98%牛奶培養(yǎng)基pUNO1-hCXCL16

Baird-Parker 瓊脂基礎(chǔ)黃藤素 97%卵磷脂吐溫稀釋液pUNO1-hCXCL17

亞碲酸鉀卵黃增菌液擬人參皂苷F11 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%UBA培養(yǎng)基pUNO1-hCXCL3

Baird-Parker 瓊脂平板安石榴苷  98%A-1培養(yǎng)基pUNO1-hCXCL5

普通肉湯培養(yǎng)基根皮苷,二水 98%M-Endo肉湯pUNO1-hCXCL6

大鼠食管上皮細(xì)胞氨氮標(biāo)準(zhǔn)溶液 100.0mg/L，基體:H2SO4Gentamycin Sulfate 硫酸慶大霉素  Amresco索非布韋（索弗布韋）Monkey cTn-I/TNNI3(cardiac Troponin I) ELISA Kit

Monkey Cys-C(Cystatin C) ELISA Kit

氨氮標(biāo)準(zhǔn)溶液100mg/L(以N計(jì))，溶劑:水Gentamycin Sulfate 硫酸慶大霉素  Amresco黃芩素Monkey ECF/CCL11(Eosinophil Chemotactic Factor) ELISA Kit

Monkey EPO(Erythropoietin) ELISA Kit

標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：醇Gentamycin Sulfate 硫酸慶大霉素  Amresco1－炔基環(huán)己醇Monkey FE(Ferritin) ELISA Kit

Monkey FETUA(Fetuin A) ELISA Kit

標(biāo)準(zhǔn)溶液 1.01mg/ml，基體：醇慶大霉素硫酸鹽  590u/mg吉西他濱Monkey GAP43(Growth Associated Protein 43) ELISA Kit

Monkey HP(Haptoglobin) ELISA Kit

間硝基氯苯標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml,溶劑：醇慶大霉素硫酸鹽  590u/mg艾捉非尼（adrafinil）Monkey IFABP/FABP2(Intestinal Fatty Acid Binding Protein) ELISA Kit

Monkey IFN-α(Interferon Alpha) ELISA Kit

對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：醇慶大霉素硫酸鹽  590u/mg芬苯達(dá)唑Monkey IFN-β(Interferon Beta) ELISA Kit

Monkey IFN-γ(Interferon Gamma) ELISA Kit

間胺標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：醇Gibberellic Acid(GA3) 赤霉素?zé)o磷保水劑Monkey IgA(Immumoglobulin A) ELISA Kit

Monkey IgE(Immunoglobulin E) ELISA Kit

對(duì)胺標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml，溶劑：醇Gibberellic Acid(GA3) 赤霉素 SIGMAD-木糖Monkey IGF-1(Insulin Like Growth Factor 1) ELISA Kit

Monkey IgG(Immunoglobulin G) ELISA Kit

水質(zhì)亞硝酸鹽標(biāo)樣 1.20mg/L，分析標(biāo)準(zhǔn)品Gibberellic Acid(GA3) 赤霉素 SIGMA稀釋劑漆Monkey IgM(Immunoglobulin M) ELISA Kit

Monkey IL-10(Interleukin-10) ELISA Kit

濃度范圍:0.421-3.32(mg/L),分析標(biāo)準(zhǔn)品Gibberellic Acid(GA3) 赤霉素 SIGMA2-基蒽醌Monkey IL-12(Interleukin 12) ELISA Kit

Monkey IL-16(Interleukin 16) ELISA Kit

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。