細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
產(chǎn)品描述:提供的原代細胞均來自新鮮組織,提供的人源原代細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術部標準的操作流程下,原代細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。科技提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、科技售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用.
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞規(guī)格 | 5×105 | YS-X6611 |
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培養(yǎng)操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
L-氨酸N-酰-L-谷氨酰胺 99%鎢pUNO1-hSARP2
L-氨酸S-芐基-L-半胱氨酸 98%三磷酸脫氧胸苷鈉鹽pUNO1-hsaTRIFΔ
L-氨酸L-半胱氨酸酯鹽酸鹽 98%三四胺六酸pUNO1-hSDF1a
L-氨酸L-半胱氨酸酯鹽酸鹽 98%肉豆蔻基三基化銨pUNO1-hSERPINB9
N-酰-L-半胱氨酸L-半胱氨酸 99%溴化十四烷基三基銨pUNO1-hSETD7
N-酰-L-半胱氨酸L-半胱氨酸 ≥98%,非動物源,用于細胞培養(yǎng)1-(2’-噻吩酰)-3,3,3-三氟酮pUNO1-hSETD8
N-酰-L-半胱氨酸L-半胱氨酸鹽酸鹽,一水 99%焦磷酸四鈉十水物pUNO1-hSF3B3
N-酰-L-半胱氨酸L-半胱氨酸鹽酸鹽無水物 98%焦磷酸四鈉pUNO1-hSHIP1b
伊紅Y鈉L-半胱氨酸鹽酸鹽 非動物源,用于細胞培養(yǎng),EP, USP正磷酸鈉pUNO1-hSIDT1b
伊紅Y鈉L-組氨酸鹽酸鹽,一水 99%無水磷酸三鈉pUNO1-hSIDT2
大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細胞規(guī)格(S)-(+)-聯(lián)萘酸酯 97%Ginkgolide A;銀杏內(nèi)酯A鈣能001Rat IL-12/p40(Interleukin 12 p40) ELISA Kit
Rat IL-16(Interleukin 16) ELISA Kit
(S,S)-(+)-N,N′-雙(3,5-二-叔基亞水楊基)-1,2-環(huán)已二胺 98%Ginkgolide C;銀杏內(nèi)酯C堿性脂肪酶Rat IL-1ra(Interleukin 1 Receptor Antagonist) ELISA Kit
Rat IL-1SRⅡ(Soluble Interleukin-1 Receptor Ⅱ) ELISA Kit
(R,R)-(−)-N,N′-雙(3,5-二叔基亞水楊基)-1,2-環(huán)已二胺 Ginkgolide B;銀杏內(nèi)酯B緩釋阻垢劑Rat IL-1α(Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit
Rat IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit
二釕(II)二聚體 97%Sophoricoside;槐角苷黃血鹽鉀Rat IL-23(Interleukin 23) ELISA Kit
Rat IL-25(Interleukin 25) ELISA Kit
雙(環(huán)戊二烯)釕 99%Sophoricoside;槐角苷通用型龜糧1937Rat IL-27(Interleukin 27) ELISA Kit
Rat IL-2Rα(Interleukin-2 Receptor-α) ELISA Kit
雙(五基環(huán)戊二烯)釕(II) 97%Rutin;蘆香草本香精Rat IL-2Rβ(Interleukin-2 Receptor-β) ELISA Kit
Rat IL-2SR(Soluble Interleukin 2 Recepter) ELISA Kit
二二羰基雙(三膦)釕 98%Rutin;蘆榆樹皮粉Rat IL-6R(Interleukin 6 Receptor) ELISA Kit
Rat IL-9(Interleukin 9) ELISA Kit
1,4 -雙(二膦)烷(1,5環(huán)辛二烯)銠(I)四氟 98%Rutin;蘆十二烷基苯鈉Rat IMA(Ischemia Modified Albumin) ELISA Kit
Rat INF-α-Ab(Interferon-α Antibody) ELISA Kit
雙(1,5-環(huán)辛二烯)-三氟銠 98%Serotonin hydrochloride;5-羥基色胺鹽酸鹽二水鈣Rat INHB(Inhibin B) ELISA Kit
Rat INHbC(Inhibin Beta C) ELISA Kit
二二銠(雙降冰片二烯) 銠 96%Rhaponiticin;土大黃苷硼砂Rat INHBP(Inhibin Binding Protein) ELISA Kit
Rat INS(Insulin) ELISA Kit
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度,計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。