細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度??萍继峁┑募?xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說(shuō)明書及注意事項(xiàng);3、科技售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用.
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞規(guī)格 | 5×105 | YS-X6611 |
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培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
L-氨酸N-酰-L-谷氨酰胺 99%鎢pUNO1-hSARP2
L-氨酸S-芐基-L-半胱氨酸 98%三磷酸脫氧胸苷鈉鹽pUNO1-hsaTRIFΔ
L-氨酸L-半胱氨酸酯鹽酸鹽 98%三四胺六酸pUNO1-hSDF1a
L-氨酸L-半胱氨酸酯鹽酸鹽 98%肉豆蔻基三基化銨pUNO1-hSERPINB9
N-酰-L-半胱氨酸L-半胱氨酸 99%溴化十四烷基三基銨pUNO1-hSETD7
N-酰-L-半胱氨酸L-半胱氨酸 ≥98%,非動(dòng)物源,用于細(xì)胞培養(yǎng)1-(2’-噻吩酰)-3,3,3-三氟酮pUNO1-hSETD8
N-酰-L-半胱氨酸L-半胱氨酸鹽酸鹽,一水 99%焦磷酸四鈉十水物pUNO1-hSF3B3
N-酰-L-半胱氨酸L-半胱氨酸鹽酸鹽無(wú)水物 98%焦磷酸四鈉pUNO1-hSHIP1b
伊紅Y鈉L-半胱氨酸鹽酸鹽 非動(dòng)物源,用于細(xì)胞培養(yǎng),EP, USP正磷酸鈉pUNO1-hSIDT1b
伊紅Y鈉L-組氨酸鹽酸鹽,一水 99%無(wú)水磷酸三鈉pUNO1-hSIDT2
大鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞規(guī)格(S)-(+)-聯(lián)萘酸酯 97%Ginkgolide A;銀杏內(nèi)酯A鈣能001Rat IL-12/p40(Interleukin 12 p40) ELISA Kit
Rat IL-16(Interleukin 16) ELISA Kit
(S,S)-(+)-N,N′-雙(3,5-二-叔基亞水楊基)-1,2-環(huán)已二胺 98%Ginkgolide C;銀杏內(nèi)酯C堿性脂肪酶Rat IL-1ra(Interleukin 1 Receptor Antagonist) ELISA Kit
Rat IL-1SRⅡ(Soluble Interleukin-1 Receptor Ⅱ) ELISA Kit
(R,R)-(−)-N,N′-雙(3,5-二叔基亞水楊基)-1,2-環(huán)已二胺 Ginkgolide B;銀杏內(nèi)酯B緩釋阻垢劑Rat IL-1α(Interleukin 1 Alpha) ELISA Kit
Rat IL-1β(Interleukin 1 Beta) ELISA Kit
二釕(II)二聚體 97%Sophoricoside;槐角苷黃血鹽鉀Rat IL-23(Interleukin 23) ELISA Kit
Rat IL-25(Interleukin 25) ELISA Kit
雙(環(huán)戊二烯)釕 99%Sophoricoside;槐角苷通用型龜糧1937Rat IL-27(Interleukin 27) ELISA Kit
Rat IL-2Rα(Interleukin-2 Receptor-α) ELISA Kit
雙(五基環(huán)戊二烯)釕(II) 97%Rutin;蘆香草本香精Rat IL-2Rβ(Interleukin-2 Receptor-β) ELISA Kit
Rat IL-2SR(Soluble Interleukin 2 Recepter) ELISA Kit
二二羰基雙(三膦)釕 98%Rutin;蘆榆樹皮粉Rat IL-6R(Interleukin 6 Receptor) ELISA Kit
Rat IL-9(Interleukin 9) ELISA Kit
1,4 -雙(二膦)烷(1,5環(huán)辛二烯)銠(I)四氟 98%Rutin;蘆十二烷基苯鈉Rat IMA(Ischemia Modified Albumin) ELISA Kit
Rat INF-α-Ab(Interferon-α Antibody) ELISA Kit
雙(1,5-環(huán)辛二烯)-三氟銠 98%Serotonin hydrochloride;5-羥基色胺鹽酸鹽二水鈣Rat INHB(Inhibin B) ELISA Kit
Rat INHbC(Inhibin Beta C) ELISA Kit
二二銠(雙降冰片二烯) 銠 96%Rhaponiticin;土大黃苷硼砂Rat INHBP(Inhibin Binding Protein) ELISA Kit
Rat INS(Insulin) ELISA Kit
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。