實驗操作步驟:
a.采用認(rèn)可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。
b.立即在無菌超凈臺內(nèi)用70%乙醇擦洗整個動物。
c.用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口,用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。
d.用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部,取出含有胚胎的子宮,置于無菌的培養(yǎng)皿上。
e.剔除胚胎周圍的包膜,將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。
f.漂洗胚胎,去掉PBS。繼續(xù)用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
公司向您推薦THP-1人急性白血病單核巨噬細胞株的詳細說明:
產(chǎn)品名稱 | THP-1人急性白血病單核巨噬細胞株 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | YS-X6344 |
描述:(1)公司可提供新鮮或凍存細胞株;(2)細胞株數(shù)量約 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細胞密度。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮細胞株,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復(fù)蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
細胞株的培養(yǎng)和傳代培養(yǎng):
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養(yǎng)于含10%小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中,培養(yǎng)對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5% CO2 的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細胞生長特性,在適當(dāng)?shù)臅r候進行傳代,一般3~4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代:
直接離心后吸去培養(yǎng)上清液,用新鮮培養(yǎng)液稀釋懸浮細胞,一般按1:2-1:5 稀釋細胞后,分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
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實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個; 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個,細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
型肝炎二對半全套(立可讀)氨基腈鹽酸鹽 98%(R)-(+)-2,2'-聯(lián)[二-(4-基苯基)膦基]-1,1'-聯(lián)萘 98%Mucor spp.
型肝炎二對半全套反-8-基-6-壬酰氯 97%(R)-(+)-2,2'-二(二-3,5-基苯基膦)-1,1'-聯(lián)萘 98%Mud Crab Dicistrovirus (MCDV)
破傷風(fēng)抗體(雙抗原夾心法)3-氨基噻吩-2-羧酸酯 99%rac-2-(二叔基膦)-1,1′-聯(lián)萘 98%Muscovy Duck Parvovirus
抗抗體 IgM(間接法二步法)3-氨基-2-氧基吡啶 98%(R)-N,N-二基-1-[(S)-1',2-雙(二苯基膦基)二茂鐵基]胺 98%Mycobacterium abscessus complex
抗抗體 IgG(間接法二步法) 4-硝基吲哚 98%(R)-(+)-2-[2-(二苯基膦)苯基]-4-異基二惡唑 98%Mycobacterium africanum
包蟲抗體IgG(間接法二步法)5嘧啶 99%(R)-(+)-1,1'-(二苯基膦基)烷 98%Mycobacterium asiaticum
消旋去堿1-(4-吡啶基) 97%(R)-1-氨基-8-(二苯基膦)-1,2,3,4 -四 97%Mycobacterium avian
鹽酸青藤堿2,4-二羥基喹啉 97%(1R,2R)-(+)-1,2-二苯基-1,2-二胺 99%Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis
綠谷隆2-喹喔啉羧酸 97%(R,R)-N-(對苯磺?;?-1,2-二苯基二胺 98%Mycobacterium avium
嘧酚(2R)-(-)-縮水甘油基對苯磺酸酯 97%(1R,2R)-(-)-N,N'-二基環(huán)己烷-1,2-二胺 ≥97.0% (GC)Mycobacterium bovis BCG
THP-1人急性白血病單核巨噬細胞株氰化亞銅 CP 恩替卡韋一水合物鹽酸胺Human GPX1(Glutathione peroxidase 1) ELISA Kit
Human LPO(Lactoperoxidase) ELISA Kit
胞苷-5'-單磷酸二鈉鹽 99% 5-氧基煙酸綠唇貽貝提取物Human EPB42(Erythrocyte membrane protein band 4.2) ELISA Kit
Human SESN3(Sestrin-3) ELISA Kit
間基苯酰氯 99% 戊酸酐桑螵蛸提取物Human DDAH1(N(G),N(G)-dimethylarginine dimethylaminohydrolase 1) ELISA Kit
Human EPHA4(Ephrin type-A receptor 4) ELISA Kit
2’-脫氧鳥苷 99% 4-溴吡啶-2-氨基酸叔酯土鱉蟲提取物Human STH(Saitohin) ELISA Kit
Human SERPINA7(Thyroxine-binding globulin) ELISA Kit
2-脫氧-D-核糖 98% 4,5-二氯氨茴酸氰酸正酯Human BIRC6(Baculoviral IAP repeat-containing protein 6) ELISA Kit
Human SLC2A13(Proton myo-inositol cotransporter) ELISA Kit
5-氟-2'-脫氧尿苷 99% 2-氨基-3-苯酸三色堇提取物Human SLC12A1(Solute carrier family 12 member 1) ELISA Kit
Human DEFB4A(Beta-defensin 4A) ELISA Kit
D-核糖 ≥99%(HPLC) Spiro-MeOTAD羥基磷灰石Human SLC8A1(Sodium/calcium exchanger 1) ELISA Kit
Human SLC11A2(Natural resistance-associated macrophage protein 2) ELISA Kit
2,6-二氯苯腈 98% 2-羥基-2-(4-溴苯基)烷積雪草總苷(積雪草甙)Human SLC25A12(Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar1) ELISA Kit
Human SLC25A13(Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar2) ELISA Kit
2,6-二氯苯醛 99% 4-氨基噠嗪異隆可濕性粉劑Human SLC30A8(Zinc transporter 8) ELISA Kit
Human UBAP2(Ubiquitin-associated protein 2) ELISA Kit
2,6-二氯苯酸 98% 4-羥基噠嗪蟲草菌粉Human CDC42(Cell division control protein 42 homolog) ELISA Kit
Human FSCN2(Fascin-2) ELISA Kit
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080),85%;北美胎牛血清(United States,GIBCO,貨號16000-044),15%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。