細胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！
名稱 | D283 Med人腦髓母細胞瘤細胞 (STR鑒定正確) |
別稱 | D283 MED; D283-MED; D-283 Med; D-283MED; D283MED; D283Med; D283-Med; D283; Med 283; H283 |
種屬 | 人 |
生長特性 | 半貼半懸 |
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 |
生長培養(yǎng)基 | MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/Sv |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO?，5%溫度：37℃ |
推薦傳代比例 | 1:2-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
參考資料(來源文獻)
背景描述 | D283 Med細胞是由Friedman等人于1985年建系，源自一名6歲患有神經(jīng)管細胞瘤有腹腔轉(zhuǎn)移的白人男性小孩的腹水細胞。 |
年齡（性別） | 男；6歲 |
組織來源 | 腦組織 |
細胞類型 | 腫瘤細胞 |
腫瘤類型 | 成髓瘤細胞 |
生物安全等級 | 1 |
倍增時間 | ~52 hours |
致瘤性 | Yes, in nude mice(The cells form serially transplantable intercranial and subcutaneous tumors.)Yes, in soft agar |
基因表達情況 | The cells produce tumors in nude mice and the resulting tumors are glutamine synthetase positive; neuron specific enolase positive; glial fibrillary acidic proteins negative; S100 (S-100) protein negative; The cells express elevated levels of four biochemical markers of SCLC (neuron specific enolase; the brain isoenzyme of creatine kinase; L-DOPA decarboxylase; bombesin-like immunoreactivity) |
保藏機構(gòu) | ATCC; HTB-185IZSLER; BS TCL 203KCB; KCB 2010201YJ |
細胞傳代：
1. 試驗準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細胞從壁上脫落下來為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細胞，細胞計數(shù)后選擇 0.8X106 個細胞加入一個 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細胞培養(yǎng)實驗基本操作：
①進無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細胞使用。
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