產(chǎn)品名稱：D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞)保存運(yùn)輸
英文名稱：D283 Med (brain blastoma cells)
規(guī)格：5×105cells/瓶
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-X0828
D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞)保存運(yùn)輸的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
收到后的處理：
1）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。
2）請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3）棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
4）如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的*培養(yǎng)基。
5）接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉?/a>。
D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞)保存運(yùn)輸培養(yǎng)操作流程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基（F-12K，GIBCO,貨號(hào)21127-022），90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混 合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換 液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3ml此細(xì)胞的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.移入到事先準(zhǔn)備好的含有5ml培養(yǎng)基的T-25培養(yǎng)瓶中或含有14ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1，細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml*，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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MIP-2(Mouse Macrophage Inflammatory Protein 2) ELISA Kit 小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白2 96T
X)ELISA Kit 大鼠Ⅰ型膠原N末端肽 96T
G-CSF(Human Granulocyte Colony Stimulating Factor) ELISA Kit 人粒細(xì)胞集落刺激因子 96T
NAP-2/CXCL7(Human neutrophil activating protein-2) ELISA Kit 人中性粒細(xì)胞趨化蛋白2 96T
HSP-27 ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白27 96T
OT(Mouse oxytocin) ELISA Kit 小鼠催產(chǎn)素 96T
MIP-3 Beta/ELC/CCL19(Mouse macrophage inflammatory protein 3 Beta) ELISA Kit 小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β 96T
大鼠Smad1 ELISA Kit 大鼠Smad1 96T
Human fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit 人趨化因子 96T
大鼠Smad7 ELISA Kit 大鼠Smad7 96T
TX(Mouse cross linked N-opeptide of type I collagen) ELISA Kit 小鼠Ⅰ型膠原N末端肽 96T
bFGF-9(Human basic fibroblast growth factor 9) ELISA Kit 人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9 96T
5-N(Mouse 5-Nucleotidase) ELISA Kit 小鼠5核苷酸酶 96T
26S PSM ELISA Kit 大鼠26S蛋白酶體 96T
bFGF-6(Human basic fibroblast growth factor 6) ELISA Kit 人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6 96T
bFGF-4(Human basic fibroblast growth factor 4) ELISA Kit 人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4 96T
TIEG1 ELISA Kit 大鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1 96T
CD19(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD19分子 96T
CD3(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD3分子 96T
visfatin ELISA Kit 大鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素 96T
aFGF-1(Human acidic fibroblast growth factor 1) ELISA Kit 人酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1 96T
TAP ELISA Kit 大鼠*原激活肽 96T
D283 Med(人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞)保存運(yùn)輸CD4(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD4分子 96T
FASL(Human Factor-related Apoptosis ligand) ELISA Kit 人凋亡相關(guān)因子配體 96T
CD8(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD8分子 96T
CFH ELISA Kit 大鼠補(bǔ)體因子H 96T
FAS/CD95(Human Factor-related Apoptosis) ELISA Kit 人凋亡相關(guān)因子 96T
BTA ELISA Kit 大鼠膀胱腫瘤抗原 96T
CD62E(Human E-Selectin) ELISA kit 人E選擇素 96T
CD25(Rat Troponin T) ELISA Kit 小鼠CD25分子 96T
CCL1(Human Eotaxin 1) ELISA Kit 人嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白 96T
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