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名稱 | HCT 116 (人結(jié)腸癌細(xì)胞) (STR鑒定正確) |
別稱 | HCT-116; HCT.116; HCT_116; HCT116; CoCL2 |
種屬 | 人 |
生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
生長培養(yǎng)基 | McCoy’s 5A＋10% FBS＋1% P/S |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃ |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
背景描述 | HCT 116細(xì)胞是由M·Brattain等人于1979年從患結(jié)腸癌的男性病人中分離的三株惡性細(xì)胞中的一株。HCT 116細(xì)胞在半固體瓊脂糖培養(yǎng)基中形成克??；HCT 116細(xì)胞在無胸腺裸鼠有致瘤性，形成腫瘤結(jié)節(jié)。 |
年齡（性別） | 男；成年 |
組織來源 | 結(jié)直腸癌 |
細(xì)胞類型 | 腫瘤細(xì)胞 |
腫瘤類型 | 腸癌細(xì)胞 |
生物安全等級 | 1 |
倍增時間 | ~25-48 hours |
致瘤性 | Yes, in nude mice. |
基因表達(dá)情況 | carcinoembryonic antigen (CEA) 1 ng per 1×10^6 cells per 10 days. |
保藏機構(gòu) | ATCC; CCL-247 BCRC; 60349 BCRJ; 0288 DSMZ; ACC-581 |
細(xì)胞傳代：
1. HCT116人結(jié)腸癌細(xì)胞試驗準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計數(shù)后選擇 0.8X106 個細(xì)胞加入一個 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
1號染色體開放閱讀框104封閉多肽 | 產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌通用PCR檢測試劑盒 |
地衣形芽孢桿菌PCR試劑盒 | 電壓依賴性陰離子通道蛋白1ELISA試劑盒 |
人β1能受體(β1AR)抗體ELISA檢測試劑盒 | 蛋白O-巖藻糖基轉(zhuǎn)移mei1ELISA試劑盒 |
人腸道病毒71型(EV71)抗體(IgM)檢測試劑盒elisa | 細(xì)胞周期suTELISA試劑盒 |
人非甲基化寡核苷suan(NON)ELISA試劑盒 | 轉(zhuǎn)運體樣蛋白4ELISA試劑盒 |
人多萜長醇二磷suan寡糖蛋白環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移mei(DDOST/OST-48)試劑盒ELISA | 白細(xì)胞酯meiELISA試劑盒 |
單核細(xì)胞趨化蛋白4封閉多肽 | 魚類神經(jīng)壞死病毒（VNN）核suan檢測試劑盒 |
LYPD3蛋白封閉多肽 | 氣管比翼線蟲PCR檢測試劑盒 |
CD99樣蛋白2封閉多肽 | 豬藍(lán)耳病病毒經(jīng)典型(PRRSV-C)核suan檢測試劑盒 |
腫瘤壞死因子配體超家族成員14封閉多肽 | 霍亂弧菌CTX基因PCR檢測試劑盒 |
ChAT乙酰轉(zhuǎn)移mei封閉多肽 | 馬乳頭瘤病毒PCR檢測試劑盒 |
RASAL3蛋白封閉多肽 | HCT116人結(jié)腸癌細(xì)胞禽波氏桿菌PCR試劑盒 |
卵透明帶糖蛋白2封閉多肽 | 腔闊盤吸蟲PCR試劑盒 |
脫氧三磷suan核苷水解mei封閉多肽 | 馬生殖泰勒氏菌PCR試劑盒 |
KB抑制蛋白激meiβ封閉多肽 | 馬皰疹病毒型PCR檢測試劑盒 |
細(xì)胞培養(yǎng)實驗基本操作：
①進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。
