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名稱 | MRC-5 (人胚肺細胞) (STR鑒定正確) |
別稱 | MRC5; MRC 5; MRCV; MRC-V; Medical Research Council cell strain-5 |
種屬 | 人類 |
年齡（性別） | 胎兒,14周齡 |
組織來源 | 肺 |
生長特性 | 貼壁細胞 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 |
背景描述 | MRC-5細胞來自14周齡男性胎兒的正常肺組織；MRC-5細胞老化前能傳代42-46次群體倍增。MRC-5細胞是正常二倍體細胞系，46條染色體、XY核型。模式染色體數(shù)為46，概率為70%。 |
生物安全等級 | 1 |
生長培養(yǎng)基 | MEM＋10% FBS＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:2-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時間 | ~36-96小時 |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
保藏機構(gòu) | ATCC; CCL-171 ECACC; 97112601 |
細胞傳代：
1. MRC-5（有限細胞系）人胚肺成纖維細胞試驗準備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細胞從壁上脫落下來為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細胞，細胞計數(shù)后選擇 0.8X106 個細胞加入一個 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
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細胞培養(yǎng)實驗基本操作：
①進無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時，應專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復蘇早期凍存的細胞使用。
