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名稱 | Hepa 1-6 (小鼠肝癌細(xì)胞) (種屬鑒定正確) |
別稱 | HEPA 1-6; Hepa1-6 |
種屬 | 小鼠 |
年齡（性別） | 不詳 |
組織來源 | 肝；肝癌 |
生長特性 | 貼壁細(xì)胞 |
細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 |
背景描述 | Hepa 1-6細(xì)胞是C57/L小鼠中產(chǎn)生的BW7756小鼠肝癌的衍生株。 |
生物安全等級 | 1 |
生長培養(yǎng)基 | DMEM＋10% FBS＋1mM Sodium Pyruvate＋1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:3-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
倍增時間 | ~24-30小時 |
凍存條件 | 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40?S+5%DMSO 溫度：液氮 |
培養(yǎng)條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
基因表達情況 | albumin, alpha fetoprotein (AFP, alpha-fetoprotein); albumin; alpha 1 antitrypsin (alpha-1-antitrypsin); amylase |
保藏機構(gòu) | ATCC; CRL-1830 BCRC; 60051 DSMZ; ACC-175 ECACC; 92110305 |
細(xì)胞傳代：
1. HEPA1-6小鼠肝癌細(xì)胞試驗準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。
3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來為止。
4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。
5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計數(shù)后選擇 0.8X106 個細(xì)胞加入一個 35mm 培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞轉(zhuǎn)染：
1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備
① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。
② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。
2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。
RRP1B蛋白封閉多肽 | 人乳頭瘤病毒6PCR檢測試劑盒直銷 |
呼吸道合胞病毒RT-PCR試劑盒 | 鈣調(diào)suELISA試劑盒 |
人促甲狀腺su(TSH)試劑盒 ELISA | 封閉蛋白24ELISA試劑盒 |
人AT豐富結(jié)合域1A(ARID1A)試劑盒ELISA | 嗜suan性白血球相關(guān)之RNA水解酵su家族成員12ELISA試劑盒 |
人IPO-38蛋白(IPO38)檢測試劑盒elisa | 分泌粒蛋白ⅤELISA試劑盒 |
人ICOS配體(ICOSLG)ELISA試劑盒 | 組蛋白H1ELISA試劑盒 |
諾如病毒蛋白封閉多肽 | 沙眼衣原體PCR試劑盒 |
氧固醇結(jié)合蛋白樣11封閉多肽 | 美人魚發(fā)光桿菌PCR試劑盒 |
DND1蛋白封閉多肽 | 皮炎芽生菌PCR試劑盒 |
遮蔽蛋白肌球蛋白輕鏈激mei封閉多肽 | 雞滑液囊支原體(MS)核suan檢測試劑盒 |
DUS2L蛋白封閉多肽 | 瘧原蟲PCR試劑盒 |
呼吸道合胞病毒封閉多肽 | HEPA1-6小鼠肝癌細(xì)胞綿羊痘病毒PCR試劑盒 |
磷suan化MAP激mei相互作用絲氨suan/蘇氨suan激mei1封閉多肽 | 米曲霉通用型PCR試劑盒 |
重組人間皮su蛋白 | 諾如病毒G4型RT-PCR試劑盒 |
組蛋白H2B封閉多肽 | 牛源性成分(Bovine)核suan檢測試劑盒 |
細(xì)胞培養(yǎng)實驗基本操作：
①進無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。
