細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
PrimaCell™大鼠成骨細(xì)胞試劑盒說明書 | 6次/盒 | YS-X6768 |
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2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
血血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性熒光定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
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體血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶(ACE)總活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
人體p16基因甲基化檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
植物半胱氨酸(cysteine)含量高效相色譜法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
細(xì)胞組織蛋白酶C(CATHEPSIN C)活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
MAPK蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:25次
植物源性飼料玉米基因檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
直腸腫瘤標(biāo)記K-ras糞便檢測突變巢式分析試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:50次
體單胺氧化酶A型(MAO-A)活性比色法定量檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
通用型馬原蟲性腦脊髓炎(Equine Protozoa Myeloencephalitis)基因檢測試劑盒 進(jìn)口/國產(chǎn) 規(guī)格:20次
PrimaCell™大鼠成骨細(xì)胞試劑盒說明書脂肪甲酯英文名稱:Fatty acid methyl ester分子式:160.16分子量: C7H12O4號(hào):627-91-8
2-硝-4-三氟甲氟分子式:209.1英文名稱:2- nitro -4- three fluorine fluorotoluene號(hào):367-86-2分子量: C7H3F4NO2
2-氯-3-硝-6-甲吡分子式:172.57英文名稱:2- -3- nitro -6-號(hào):56057-19-3分子量: C6H5ClN2O2
異吲哚啉分子式:119.16英文名稱:ISO -號(hào):496-12-8分子量: C8H9N
3--5-溴三氟甲分子式:240.02英文名稱:3- amino -5- bromine three fluorine toluene號(hào):54962-75-3分子量: C7H5BrF3N
2-氯-5-吡分子式:128.56英文名稱:2- -5- amino pyridine號(hào):5350-93-6分子量: C5H5ClN2
長春質(zhì)堿英文名稱:Changchun base分子式:810.97分子量:C46H58N4O9號(hào):865-21-4
大薊苷英文名稱:Effects of glycosides分子式:622.57分子量:C29H34O15號(hào):28978-02-1
氟禾草靈英文名稱:Lactofen分子式:461.77分子量: C19H15ClF3NO7號(hào):77501-63-4
β,β-氧二英文名稱:Beta, beta two oxygen propionitrile分子式:124.14分子量: C6H8N2O號(hào):1656-48-0
英文名稱:Digoxin分子式:780.94分子量:C41H64O14號(hào):20830-75-5
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。