特點優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐
的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:人線粒體DNA探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號:YS-P013706
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品分類:PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.公司產(chǎn)品僅用于科研對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液(最好用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
猴膽固酯轉移蛋白(CETP)人參皂苷F3(標準品)巨噬炎癥蛋白2( GROβ)抗體
猴嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CYPB) 槐定堿(標準品)金屬硫蛋白抗體
猴白介素12 p40(IL-12 p40)去澤拉木(標準品)磷酸化微管相關蛋白2抗體
猴載脂蛋白A2(ApoA2) 鹽酸去氫駱駝蓬堿(標準品)內(nèi)皮MMRN1蛋白抗體
猴β干擾素(IFN-β)巖大戟內(nèi)酯B(標準品)磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1/2抗體
猴DNA結合蛋白(DBP) 路路通內(nèi)酯(標準品)磷酸化肝生長因子受體(原癌因)抗體
猴核糖核酸酶T2(RNASET2)甘油三油酸酯(標準品)磷酸化肝生長因子受體(原癌因)抗體
猴軟骨寡聚質(zhì)蛋白(COMP) 長春花堿(標準品)磷酸化髓樣白血病-1抗體
猴絨毛蛋白(CVL/EZR) 長春花堿磷酸化雙微體2癌因抗體
猴破骨相關受體(OSCAR)脫水長春堿(標準品)磷酸化肌增強因子2抗體
猴半乳凝集素14(GAL14)長春新堿(標準品)磷酸化肌增強因子2抗體
猴過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)硫酸金雀花堿;硫酸司巴?。藴势罚┝姿峄z裂原活化蛋白激酶激酶1抗體
猴T急性淋巴母白血病相關抗原(TALLA-1/CD231)高烏素(標準品)磷酸化微管相關蛋白2抗體
猴腸三葉肽因子3(TFF3)番茄紅素(標準品)絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體
猴八聚體結合轉錄因子2(OBTF2)苔黑酚葡萄糖苷;地衣二葡萄糖苷(標準品)磷酸化絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體
猴纖維連接素相關抗原(FRA) 短葶山麥冬皂苷C(標準品)磷酸化絲裂原活化蛋白激酶活化的蛋白激酶2抗體
人線粒體DNA探針法熒光定量PCR試劑盒CT-R/FITC 熒光素標記降鈣素受體抗體IgG2-酰-5-降烯 95%
CSMD1/FITC 熒光素標記抑癌因CSMD1抗體IgGN-烯咔唑 98%
CTBP1/FITC 熒光素標記C端結合蛋白1抗體IgG4,5-雙二膦-9,9-二氧雜蒽 98%
CT DNA /FITC 熒光素標記兔抗小牛胸腺DNA 抗體IgG2-氨-4-氯-6-氧嘧啶 99%
CT DNA /Gold 膠體金標記兔抗小牛胸腺DNA 抗體IgG(10nm/15nm)2-氨-4,6-二氧嘧啶 98%
CTGF/FITC 熒光素標記結締組織生長因子抗體IgG3-氨吡-2-羧酸 98%
CTLA-4/CD152 /FITC 熒光素標記淋巴相關抗原4/性T抗原-4抗體IgG2-氨-6-氯嘌呤 98%
CTSC/PALS/DPP-I/FITC 熒光素標記組織蛋白酶C抗體IgG2-氨-4-氧-6--1,3,5-三 98%