特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
磷脂酶C(PLC)測(cè)試盒微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | BJ-01611193-1 |
商品介紹:
測(cè)定意義 磷脂酶C(EC3.1.4.3)是一種水解甘油磷酸酯C3位點(diǎn)甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶,廣泛存在于微生物及動(dòng)植物的組織和細(xì)胞中,在細(xì)胞代謝、細(xì)胞傳遞、生長(zhǎng)發(fā)育等方面具有重要作用。 測(cè)定原理 磷脂酶C催化水解NPPC產(chǎn)生對(duì)硝基ben酚,在410nm處有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。 |
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒有顏色,如果設(shè)置了使用說明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
風(fēng)疹病 IgM(捕獲法一步法)小單孢菌小鼠免疫球蛋白G2a(IgG2a)elisa定量檢測(cè)試劑盒
白G Fc段受體Ⅰ枯草芽孢桿菌小鼠胃動(dòng)su(MTL)elisa定量檢測(cè)試劑盒
鮭魚補(bǔ)體蛋白3洪吉氏菌小鼠肝臟糖原磷酸化酶(PYGL)elisa定量檢測(cè)試劑盒
兔子α2抗纖溶酶硬毛栓孔菌小鼠生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白2(Grb2)elisa定量檢測(cè)試劑盒
小鼠乳酸脫氫酶毛頭鬼傘小鼠骨橋su(OPN)elisa定量檢測(cè)試劑盒
大鼠高鐵血紅蛋白黑球漆斑菌小鼠肝核因子1β(HNF1b)elisa定量檢測(cè)試劑盒
風(fēng)疹胞病 IgM(捕獲法二步法)釀酒酵母小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白1(HABP1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
弓形蟲抗體 IgG(間接法二步法)氧化節(jié)桿菌小鼠線粒體解偶聯(lián)蛋白1(UCP-1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
弓形蟲抗體 IgM(間接法二步法)草菇小鼠脂蛋白脂酶(LPL)elisa定量檢測(cè)試劑盒
弓形蟲抗體 IgM(捕獲法一步法)小鼠高鐵血紅蛋白(MHB)elisa定量檢測(cè)試劑盒
弓形蟲抗體 IgM(捕獲法二步法)球孢白僵菌小鼠生長(zhǎng)分化因子15(GDF15)elisa定量檢測(cè)試劑盒
單純皰疹Ⅰ型病 IgG(間接法二步法)枯草芽孢桿菌小鼠生長(zhǎng)因子受體結(jié)合蛋白7(Grb7)elisa定量檢測(cè)試劑盒
單純皰疹Ⅰ型病 IgM(間接法二步法)平菇(側(cè)5)小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AA(PDGF-AA)elisa定量檢測(cè)試劑盒
單純皰疹Ⅰ型病 IgM(捕獲法一步法)大腸埃希氏菌小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)elisa定量檢測(cè)試劑盒
單純皰疹Ⅰ型病 IgM(捕獲法二步法)變異納西桿菌小鼠血小板生成su(TPO)elisa定量檢測(cè)試劑盒
磷脂酶C(PLC)測(cè)試盒微量法甲基化酶(Methylase)試劑盒Anti-PAX5 AntibodySLU7蛋白
CD3d分子(CD3d)試劑盒Anti-PAX6 Antibody(PB0821)信號(hào)肽肽酶SPP
超氧化物歧化酶1(SOD1)試劑盒Anti-PCDH15 Antibody類固5α還原酶1(5α-Reductase 1)
α1酸性糖蛋白(α1-AGP)試劑盒Anti-PAX8 Antibody蘋果14-3-3蛋白(植物)
趨化因子CX3C受體1(CX3XR1)試劑盒Anti-PBK Antibody角質(zhì)蛋白α
CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白β(C/EBPβ)試劑盒Anti-PCK1/PEPC Antibody角質(zhì)蛋白β
S100鈣結(jié)合蛋白A11(S100A11)試劑盒 Anti-PCK2 Antibody粘附分子伴侶蛋白1
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后