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顯微課堂:選擇合適的熒光濾光片

來(lái)源:上海倍萊德儀器有限公司   2024年12月24日 08:07  

選擇合適的熒光濾光片是確保生物醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)儀器中熒光檢驗(yàn)分析系統(tǒng)性能的關(guān)鍵步驟。以下是根據(jù)參考文章提供的信息,關(guān)于如何選擇合適的熒光濾光片的詳細(xì)指南:

  1. 理解熒光濾光片的基本結(jié)構(gòu)和功能

    • 熒光濾光片通常包含三片組合:激發(fā)濾光片、發(fā)射濾光片和二色鏡。

    • 激發(fā)濾光片負(fù)責(zé)篩選合適激發(fā)光波長(zhǎng),如將白光激發(fā)光篩選為藍(lán)光,用于激發(fā)GFP等熒光素。

    • 發(fā)射濾光片負(fù)責(zé)篩選需要的熒光發(fā)射光,并過(guò)濾掉不需要的雜散光、瑞利光和雜質(zhì)所發(fā)射的熒光。

    • 二色鏡用于區(qū)分激發(fā)光和發(fā)射光,是熒光濾光片組合中的關(guān)鍵元件。

  2. 根據(jù)熒光素的光譜特性選擇濾光片

    • 確定所使用的熒光素的激發(fā)和發(fā)射光譜,這可以通過(guò)查詢常用的熒光光譜查看器或熒光素供應(yīng)商的網(wǎng)站來(lái)獲取。

    • 選擇與熒光素光譜匹配的濾光片,確保濾光片的光譜范圍能夠覆蓋熒光素的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)。

  3. 考慮光源的光譜特性

    • 根據(jù)所使用的激光光源或照明系統(tǒng)的光譜特性,選擇濾光片時(shí)避免選擇光源發(fā)射較弱的區(qū)域,以確保足夠的激發(fā)光強(qiáng)度和熒光信號(hào)。

  4. 注意濾光片的截止深度和自發(fā)熒光

    • 選擇截止深度深、自發(fā)熒光小的濾光片,以提高熒光成像的信噪比和清晰度。

    • 較好的熒光濾光片采用單片無(wú)色透明的玻璃作為基底,在玻璃的兩個(gè)表面鍍膜,這種單片式熒光濾光片在熒光成像上有明顯優(yōu)勢(shì)。

  5. 考慮濾光片的透射面形和成本

    • 選擇透射面形好的濾光片,有利于熒光成像的提取。

    • 單片式熒光濾光片的制作難度較高,成本也相應(yīng)較高,因此需要根據(jù)預(yù)算和性能需求進(jìn)行權(quán)衡。

  6. 參考特定應(yīng)用領(lǐng)域的建議

    • 對(duì)于針對(duì)某種特征領(lǐng)域的特種熒光物質(zhì),需要根據(jù)使用場(chǎng)合、環(huán)境因素、光源以及熒光物質(zhì)的熒光光譜來(lái)綜合確定濾光片的選擇。

綜上所述,選擇合適的熒光濾光片需要綜合考慮熒光素的光譜特性、光源的光譜特性、濾光片的截止深度、自發(fā)熒光、透射面形和成本等因素。通過(guò)仔細(xì)比較不同濾光片的性能參數(shù)和價(jià)格,結(jié)合具體應(yīng)用場(chǎng)景的需求,可以選出的熒光濾光片。


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