国产精品成人网站,精品人妻互换一区二区三区,大肉大捧一进一出视频免费的试看,婷婷激情综合网

產品推薦:水表|流量計|壓力變送器|熱電偶|液位計|冷熱沖擊試驗箱|水質分析|光譜儀|試驗機|試驗箱


儀表網(wǎng)>技術中心>技術交流>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

多通道活細胞成像注意事項

來源:上海倍萊德儀器有限公司   2024年12月24日 08:04  


同時多色成像,確保實驗成功



顯微鏡

活細胞成像實驗是了解動態(tài)過程的關鍵。這類實驗使我們能夠觀察記錄活體狀態(tài)下的細胞,而不會可能因固定或終止不同活體過程而產生干擾性偽影。


通過活細胞成像可以觀察細胞、組織或整個生物體在其自然環(huán)境中的動態(tài)過程,而不僅僅是獲得終點圖像和數(shù)據(jù)。例如,您可以研究細胞或蛋白質的共定位,以查看不同的靶點是否彼此相鄰,并觀察它們如何相互作用。

為什么使用多個熒光標記很重要?

在活細胞顯微成像中使用多通道方法可以同步觀察多個細胞結構和過程,提供生理學方面更重要的結果,從而為測量數(shù)據(jù)增加相關信息。通過這種方法可以研究細胞與蛋白質相互作用、動態(tài)變化以及這些變化如何相互作用和影響。不過,使用單個熒光團的實驗很常見,而使用兩個或多個熒光探針對活細胞成像可能會很復雜,并且必須仔細考慮幾個要點才能成功。本文將介紹有關成功設置多色活細胞實驗的一些關鍵方面。


選擇合適的熒光團

設置多色活細胞實驗時,首先要選擇合適的熒光團,這一點至關重要。熒光團必須與活體樣本相容,并具有光穩(wěn)定性,才能進行長期成像。熒光蛋白標記、活細胞染料、動態(tài)標記(如 Ca2+ 指示劑)及其他用于標記感興趣靶標的方法是達到這類目的的合適工具。但是,由于發(fā)射光譜寬,以多通道方式研究活細胞過程時可供選擇的熒光染料仍然相當有限。每使用一個額外的標簽,找到具有高特異性和高信號輸出的激發(fā)/探測模式就變得更加困難。將兩個或多個熒光團信號一起成像時,需要使用復雜的標記策略減少光譜重疊。


在生理條件下成像

無論使用細胞培養(yǎng)物、類器官、球狀體還是較小的模式生物,都必須使用近生理條件來確保樣本保持活力。在延時實驗中,某些條件必須保持狀態(tài),才能確保細胞不僅能夠存活,而且不會承受壓力,并保持真實的生理機能。通常情況下使用培養(yǎng)箱(37°C、二氧化碳、濕度,有時還包括在一段時間內具有高穩(wěn)定性的氧氣)確保持續(xù)提供近生理條件。此外,選擇一種低自發(fā)熒光、不會干擾信號且不影響成像的介質也大有好處

視頻:RPE 細胞分裂的 12 小時共聚焦延時視頻,細胞穩(wěn)定表達 eGFP-tubulin(青色)和 iRFP-Histone H2B(品紅色)。由美國巴爾的摩約翰霍普金斯醫(yī)學院荷蘭實驗室 C. Gliech 提供。荷蘭實驗室致力于研究各種控制染色體精確分布的分子機制,以及有絲分裂錯誤在人體健康和疾病中起到的作用。


圖像采集注意事項

寬場顯微成像通常是活細胞成像的,因為它能夠更快、更溫和地成像。的寬場顯微成像使用 LED 光源和濾光片組。盡管有很多濾光片都可以用于各種不同的熒光團組合,但是為了獲得用多個熒光團標記的樣本的正確圖像,需要考慮多個因素。


大多數(shù)用于活細胞成像的熒光團都具有寬發(fā)射光譜。這一事實通常意味著各個探測通道之間會出現(xiàn)串擾現(xiàn)象,例如,您會在紅色探測通道中看到來自綠色通道的一些發(fā)射光。在活細胞成像實驗中使用多個標記時,熒光光譜重疊現(xiàn)象很常見,因此為了確保看到想識別的細節(jié),可以使用窄帶濾光片。但是,這種方法會導致靈敏度下降并影響結果,因為活細胞中的熒光團信號水平通常較低,尤其是對于靶標豐度稀疏的樣本或以內源性水平表達的樣本。使用更多激發(fā)光來抵消靈敏度下降通常不可行,因為這種方法對樣本的危害性會增加(即光毒性增加)。


在活細胞實驗中,高速采集通常至關重要,特別是在研究快速動態(tài)過程時,如囊泡觀察。使用濾光片會導致速度受限,因為在改變每種顏色的濾光片組時必須依次成像。按順序采集圖像比同時采集圖像需要更多時間,因此在采集過程中可能會錯過樣本的快速運動,因為從一個圖像到下一個圖像時每種顏色都有更長的時間間隔。此外,當兩種或多種顏色之間的直接比較至關重要時,例如在上述囊泡觀察實驗中:信號甚至可能在兩次熒光團采集之間已經移動,從而加大數(shù)據(jù)解釋的難度。


改善活細胞成像的替代方案

研究活細胞中多個探針之間的相互作用而獲得的大量信息可提供生理學方面更重要的結果,因此人們開發(fā)了多種方法來拆分復雜的混合發(fā)射光信號。


為了能夠使用多個標簽,以便從一個樣本中獲得更深入的認識,您可以使用光譜圖像信息線性拆分方法,它可以分析每個熒光團對總信號的貢獻。要進行線性光譜拆分,必須為所有可能的參考光譜混合方式計算未知光譜與參考光譜之間的最小差值 (1)。這種方法通常用于對多種顏色成像,即使它們重疊。但是在寬場顯微成像中,您仍可能遺漏關鍵信息,因為必須對樣本中每個熒光團依次成像,這會導致速度受限。


如果采用其他方法會怎樣?

有一種方法可以快速拆分多種顏色,而不必擔心采集期間光譜重疊,也無需學習復雜的光譜拆分方法。


最近發(fā)表的一些文章介紹了一種基于相量的光譜拆分方法 (2, 3)光譜相量分析可將每個像素的光譜成分轉換為二維圖中的一個位置。這樣就可以利用簡單的數(shù)學方法即時、可靠地分離不同染料的發(fā)射光。此外,它還可以僅基于光譜而不是強度來增加濾光——從而保留圖像的細微細節(jié),同時減少可能會影響線性光譜拆分的噪聲。由于實際上消除了串擾以及自發(fā)熒光等干擾因素,選擇合適的熒光探針組合不再是問題,因此以這種方式成像可以更輕松地設置多通道活細胞成像實驗。


參考資料:

1.T. Zimmermann,《生物化學工程進展/生物技術》2005, 95, 245

2.F. Fereidouni、A. N. Bader、H. C. Gerritsen《Opt.Express》2012, 20, 12729。

3.Francesco Cutrale、Vikas Trivedi、Le A Trinh、Chi-Li Chiu、John M Choi、Marcela S Artiga 和 Scott E Fraser,高光譜相量分析可實現(xiàn)多通道 5D 體內成像, 《自然·方法學》14, 149–152 (2017) doi:10.1038/nmeth.4134


相關產品

顯微鏡

MICA全場景顯微成像分析平臺

免責聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:儀表網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-儀表網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網(wǎng)授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網(wǎng)授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:儀表網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關法律責任。
  • 本網(wǎng)轉載并注明自其它來源(非儀表網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點或和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關權利。
聯(lián)系我們

客服熱線: 15267989561

加盟熱線: 15267989561

媒體合作: 0571-87759945

投訴熱線: 0571-87759942

關注我們
  • 下載儀表站APP

  • Ybzhan手機版

  • Ybzhan公眾號

  • Ybzhan小程序

企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87759942
颜射在线| 欧美人体一区二区| 激情乱岳300篇| 婷婷五月天影院| 国产精品一区一区三区mba下载| 97无码精品人妻免费一区二区| 91人妻人人澡人人爽人人麻豆| 久久99国产精品久久99咪诱| 久久精品午夜一区二区福利| 国产999免费视频| 亚洲精品电影在线观看| 中文无码在线电影| 亚洲无码日韩av| 精品国产乱码久久久久久闺蜜| 亚洲欧美综合自拍| 午夜av资源| 亚洲淫网| 久久国产精品无码网站| 在线观看免费人成视频| 99热一本到久久精品| 中文字幕无线精品亚洲乱码一区| 91人妻人人爽人人澡人人精品| 少妇精品| 人人干超碰| 久久青青草原亚洲AV无码国产 | 国产成人无码专区在线观看| 色呦呦中文字幕| 久久人爱爱精品一应二三| HEYZO高无码专区人妻久久| 国产成人香蕉| 综合久久久久| 97超级碰碰| 久久国产成人无码一区二区三区 | 猫咪AV成人永久网站在线观看| 亚洲乱码一区二区三区| 二区av| 日韩精品第一区| 亚洲精品成人片在线观看| 久久久久99精品久久久久| 69久蜜桃人妻无码精品一区| 国产无码啪啪|