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細胞培養(yǎng)是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究常用的手段之一,可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩種。原代培養(yǎng)是直接從生物體獲取組織或器官的一部分進行培養(yǎng),也稱初代培養(yǎng)。嚴格地說即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代階段,但實際上,通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。一般持續(xù)1-4周。此期細胞呈活躍的移動,可見細胞分裂,但不旺盛。 那么原代細胞培養(yǎng)過程中可能存在的問題有哪些?一起來學(xué)習(xí)一下吧!
污染:轉(zhuǎn)移主要組織進行培養(yǎng)時需要注意避免污染。
pH值變化:這可能是由于培養(yǎng)基中的鹽分不正確,細菌或真菌污染,碳酸氫鹽緩沖液不足,二氧化碳張力不正確等引起的。
粘附性不足(細胞不貼壁):培養(yǎng)基中不含附著因子(attachment factors)或附著因子不足,培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基污染,細胞被yi蛋白酶過度消化等。
生長緩慢:原因包括培養(yǎng)基的pH值變化,必需的促進生長的成分/因子耗盡,低污染,試劑儲藏不當(dāng)?shù)取?/span>
細胞死亡:溫度波動,二氧化碳含量過低,在融化和/或冷凍保存過程中細胞受損,有毒代謝產(chǎn)物濃度增加,培養(yǎng)基中的滲透壓失衡導(dǎo)致細胞存活率降低。
沉淀(pH不變):由于使用了冷凍培養(yǎng)基,在pH不變的培養(yǎng)基中可能會出現(xiàn)沉淀,殘留的磷酸鹽殘留在用洗滌劑洗滌時可能會沉淀出粉末狀的培養(yǎng)基成分。
細胞結(jié)塊(細胞不貼壁且結(jié)塊):懸浮細胞可能由于鈣、鎂離子的存在(貫流時應(yīng)使用不含鈣、鎂離子的D-Hank’s緩沖液(D-HBSS),而不能選擇含有鈣、鎂離子的HBSS或可能含有鈣、鎂離子的PBS緩沖液)或細胞裂解及DNA釋放(過度用蛋白水解酶消化)而結(jié)塊。
誘導(dǎo)變異性:多種試劑和培養(yǎng)基會誘導(dǎo)原代細胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異,研究者的處理手法也可能導(dǎo)致原代細胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異。
以上就是有關(guān)于原代細胞培養(yǎng)過程中可能存在的問題的解答,如果你想了解更多請咨詢百奧創(chuàng)新客服哦!
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