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酶標(biāo)儀(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一種常用的實驗技術(shù),用于檢測和定量分析生物樣品中特定分子的存在或濃度,如蛋白質(zhì)、抗體、激素等。它主要基于酶與抗原或抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)來實現(xiàn)。
酶標(biāo)儀的基本使用方法如下:
準(zhǔn)備試劑和樣品:根據(jù)實驗的要求準(zhǔn)備好所需的試劑和樣品,包括酶標(biāo)板、酶標(biāo)板涂層物、抗原或抗體溶液、標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品和待測樣品等。
酶標(biāo)板涂層:將涂有特定抗原或抗體的酶標(biāo)板孔進行涂層。涂層可以通過直接涂層法、間接涂層法或夾心法等不同的方法進行。
洗滌:用洗滌緩沖液洗滌酶標(biāo)板,去除未結(jié)合的物質(zhì),以減少非特異性背景信號。
孵育:將待測樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品加入酶標(biāo)板的孔中,使其與涂層的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)。孵育時間和溫度根據(jù)實驗要求設(shè)定。
洗滌:再次用洗滌緩沖液洗滌酶標(biāo)板,去除未結(jié)合的物質(zhì)。
反應(yīng):加入特定的酶標(biāo)記物(通常是辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶),使其與待測樣品中的目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合。
洗滌:進行*后一次洗滌步驟,去除未結(jié)合的酶標(biāo)記物。
反應(yīng)停止:加入適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)停止液,使酶標(biāo)記物的反應(yīng)停止。
讀取結(jié)果:使用酶標(biāo)儀測量吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中目標(biāo)物質(zhì)的濃度。
需要注意的是,具體的酶標(biāo)儀使用方法可能會因不同型號和品牌而有所差異,因此在進行實驗前,應(yīng)仔細(xì)閱讀并按照儀器和試劑的說明書進行操作。
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