液相色譜,在一玻璃管中放入碳酸鈣,將含有植物色素(植物葉的提取液)的石油醚倒入管中。此時(shí),玻璃管的上端立即出現(xiàn)幾種顏色的混合譜帶。然后用純石油醚沖洗,隨著石油醚的加入,譜帶不斷地向下移動(dòng),并逐漸分開(kāi)成幾個(gè)不同顏色的譜帶,繼續(xù)沖洗就可分別接得各種顏色的色素,并可分別進(jìn)行鑒定。是利用混合物在液-固或互不相溶的兩種液體之間分配比的差異,對(duì)混合物進(jìn)行先分離而后分析鑒定的儀器,應(yīng)用極其廣泛。此種儀器在使用過(guò)程中,難免會(huì)出現(xiàn)各種各樣的問(wèn)題,并將直接影響到所測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和儀器的正常工作。因此,在使用維護(hù)過(guò)程中,對(duì)液相色譜儀的要求:
1.流動(dòng)相必須用HPLC級(jí)的試劑,使用前過(guò)濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45μm或更細(xì)的膜過(guò)濾)。
2.流動(dòng)相過(guò)濾后要用超聲波脫氣,脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。
3.不能用純乙腈作為流動(dòng)相,這樣會(huì)使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液。
4.使用緩沖溶液時(shí),做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時(shí),然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上,以充分洗去離子。對(duì)于柱塞桿外部,做完樣品后也必須用去離子水沖洗20mL以上。
5.長(zhǎng)時(shí)間不用儀器,應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存,注意不能用純水保存柱子,而應(yīng)該用有機(jī)相(如,甲醇等),因?yàn)?,純水易長(zhǎng)霉。
6.每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。
7.C18柱不能進(jìn)蛋白樣品,血樣、生物樣品。
8.堵塞導(dǎo)致壓力太大,按預(yù)柱→混合器中的過(guò)濾器→管路過(guò)濾器→單向閥檢查并清洗,清洗方法:
?、僖援惐甲魅軇_洗;
②放在異丙醇中間用超聲波清洗;
?、塾?0%稀硝酸清洗;
9.氣泡會(huì)致使壓力不穩(wěn),重現(xiàn)性差,所以在使用過(guò)程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡。
10.如果進(jìn)液管內(nèi)不進(jìn)液體時(shí),要使用注射器吸液:通常在輸液前要進(jìn)行流動(dòng)相的清洗。
11.要注意柱子的pH值范圍,不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品,特別是堿性樣品。
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