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如何確保固相多肽合成(SPPS)中的肽純度和產(chǎn)量

來源:岐昱實業(yè)(上海)有限公司   2023年03月17日 13:21  



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01/

如何測定肽純度








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02/

不同標準下肽純度的應(yīng)用

2.1

合成不同純度肽的應(yīng)用指南

2.1.1

低純度(>50%):該水平適用于先導(dǎo)化合物的高通量篩選。如果您正在研究免疫應(yīng)答,除去特定的污染物,>70%可以用于抗原制備。

2.1.3

高濃度(>90%):該水平適用于定量生物測定、定量體外受體-配體相互作用研究、配體結(jié)合的生物活性研究、定量阻斷和競爭性抑制試驗、定量磷酸化和蛋白水解研究、電泳標記和色譜標準分析。

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03/

優(yōu)化合成以達到所需濃度








3.1

合成前的關(guān)鍵優(yōu)化步驟

3.1.1

序列分析:例如使用軟件在合成之前進行合成預(yù)測,以確定在整個合成過程中是否存在合成難度很大的區(qū)域。

3.2

固相多肽合成(SPPS)過程中關(guān)鍵步驟

3.2.1

樹脂選擇:SPPS通常在與1%二乙烯基苯(DVB)交聯(lián)的聚苯乙烯上進行。替代品包括聚乙二醇(PEG)衍生物,樹脂的選擇會影響合成成功率和粗品的純度。連接到柱上的連接物提供生長肽和固相載體之間的可逆連接,并確定最終產(chǎn)物的性質(zhì)和可使用的化學(xué)性質(zhì)。接頭的選擇決定了最終產(chǎn)物中的C端官能團。

3.2.3

反應(yīng)溫度:提高溫度可能會加快合成并提高純度,但并不總是如此。需要注意的是,基于微波的加熱只是加熱,微波本身對合成沒有特殊影響。

3.2.5

雙重耦合:預(yù)測軟件確定的困難耦合可以通過雙重耦合、延長耦合時間或添加更多等效物來處理。

3.2.7

封端:這樣做是為了在偶聯(lián)反應(yīng)后阻斷任何未反應(yīng)的氨基,或使完整肽的N-末端乙?;?。它對于在合成困難或長肽期間最小化缺失產(chǎn)物和輔助純化過程是有很用的。

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04/

選擇一種能夠快速合成高純度肽的多肽合成儀








4.1

用于篩選方法和試劑的平行反應(yīng)容器

正如我們所看到的,優(yōu)化可以涉及查看大量的變量,并行運行不同試劑組合的能力將大大加快優(yōu)化過程。













4.3

溫度控制

提高溫度可以提高某些序列的純度。能夠同時測試不同溫度對提高生產(chǎn)率能力的影響。













4.5

稀有單體無需單次注射

特殊化學(xué)中使用的許多單體和試劑可能昂貴或珍貴,因此一些合成劑可從任何氨基酸/單體瓶位置提供免“單次注射”添加,以確保不會浪費任何東西。







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