濟(jì)南免疫親和柱是利用免疫親和層析原理即利用生物大分子具有對(duì)某一類生物大分子特異識(shí)別和可逆結(jié)合的特性而制成,用以分析檢測(cè)抗體或抗原的親和層析柱。
原理:
測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),抗體連接在柱體內(nèi),樣品經(jīng)過(guò)提取、稀釋后,緩慢的通過(guò)三合一免疫親和柱,在免疫親和柱內(nèi)抗體與樣本中的雌酚類結(jié)合,之后洗滌免疫親和柱去除沒(méi)有被結(jié)合的雜質(zhì)。然后用洗脫液洗脫雌酚類,洗脫產(chǎn)物用合適的分析儀器進(jìn)行檢測(cè)。
濟(jì)南免疫親和柱使用注意事項(xiàng):
1、上柱的樣品溶液應(yīng)該保持酸堿中性、無(wú)懸浮物、甲醇濃度不宜過(guò)高;
2、若樣品為復(fù)雜樣品,例如高蛋白、高油脂、酸性樣品,可以將提取液分兩次提取樣品,可以提高提取效果;
3、樣品過(guò)柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻,約每秒1-2滴;
4、抗原抗體發(fā)生反應(yīng)的較佳溫度是在25℃左右,實(shí)驗(yàn)需要的環(huán)境溫度較好是室溫24℃-28℃,太高或太低的溫度都會(huì)對(duì)親和柱的回收率有一定的影響。在使用前需要恢復(fù)至室溫再進(jìn)行實(shí)驗(yàn);
5、不要在無(wú)水狀態(tài)下,瓊脂容易干燥,影響親和柱的質(zhì)量;
6、親和柱儲(chǔ)存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫,因?yàn)榫彌_液凍結(jié),會(huì)嚴(yán)重影響親和柱內(nèi)的物理結(jié)構(gòu),對(duì)親和柱的質(zhì)量影響很大;
7、洗脫一般選擇試劑甲醇,為增強(qiáng)洗脫效果可加大甲醇體積;
8、樣液免疫親和柱凈化后,洗脫液過(guò)0.45um或更小孔徑濾膜效果更好。