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1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
驅(qū)動蛋白KIF5B抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KLF5
kelch樣蛋白13抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KLHL13
鈣激活鉀通道蛋白3抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KCNN3
腎臟和腦蛋白抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KIBRA
有絲分裂驅(qū)動蛋白樣2B抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KIF2B
kelch樣蛋白9抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KLHL9
驅(qū)動蛋白家族成員15抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KIF15
著絲點關(guān)聯(lián)蛋白1抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KNTC1
kelch樣蛋白5抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KLHDC5
驅(qū)動蛋白家族成員C1抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KIFC1
Kelch樣蛋白22抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KLHL22
電壓門控鉀通道Kv4.1抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KCND1
酸敏感鉀離子通道蛋白3抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KCNK3
Klotho多肽蛋白抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:Klotho
鈣激活鉀通道蛋白4抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KCNN4
Kelch樣蛋白23抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KLHL23
BTB-kelch蛋白家族10抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KBTBD10
BTB-kelch蛋白家族4抗體現(xiàn)貨供應(yīng)英文名稱:KBTBD4
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