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目前生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展處于快速上升期，后疫情時代的醫(yī)藥健康行業(yè)，迎來新一輪的變革與機遇。其中，抗體藥物、細胞與基因治療藥物被認為是未來醫(yī)藥領域發(fā)展的主力軍。無論是抗體藥物的生產(chǎn)還是基于病毒載體的基因治療藥物的制備，都涉及單克隆細胞株的篩選。在工藝開發(fā)過程中，研發(fā)人員需要分離單細胞克隆，篩選出高產(chǎn)且穩(wěn)定的細胞株來建立種子細胞庫和工作細胞庫，用于后續(xù)的病毒載體或抗體等藥物的生產(chǎn)。

2020年，美國（FDA）更新了關于基因治療臨床試驗申請(INDs)的化學、制造和控制指導原則（Chemistry, Manufacturing, and Control Information for Human Gene Therapy Investigational New Drug Applications），內容包含穩(wěn)轉細胞株開發(fā)及細胞克隆性確證等。文件指出，細胞庫（Cell bank）的穩(wěn)定性及純度是一個需要考慮的重要方面。非單克隆來源的細胞群中，其細胞異質性相對較高，外源蛋白產(chǎn)量低的細胞系往往與蛋白高產(chǎn)的細胞群體競爭，導致高產(chǎn)細胞個體占比越來越少，最終隨著傳代次數(shù)的增加，導致細胞庫或工作庫的質量下降，因此，通過單克隆細胞篩選是提高病毒載體質量的重要步驟。單克隆源性的確證是一種控制細胞種群降低其異質性的方法，通過防止異種細胞群體的產(chǎn)生，來保障未來生產(chǎn)出的病毒產(chǎn)品的質量不受影響。CEVEC公司（CEVEC Pharmaceuticals）針對 ELEVECTA® AAV包裝細胞系的研究數(shù)據(jù)顯示，通過單克隆篩選出的細胞株其AAV產(chǎn)量要比非單克隆細胞來源的高10倍左右。除了細胞基因治療產(chǎn)品，針對抗體藥物，F(xiàn)DA的政策法規(guī)也要求工藝生產(chǎn)細胞系須是從單個祖細胞克隆來源的，生物制藥企業(yè)需提供有力的數(shù)據(jù)證據(jù)以證明藥物研發(fā)過程中的單克隆源性，上述相關的政策法規(guī)對藥物開發(fā)制備工藝中細胞單克隆篩選操作及細胞單克隆源性確證提出了更高的要求。

目前常見的單克隆細胞篩選方法，包括有限稀釋法、半固體培養(yǎng)基篩選法、流式細胞術分選及單細胞分離法等。有限稀釋法、半固體培養(yǎng)基篩選法的優(yōu)點是對細胞的物理損傷小，弊端是耗時長、效率低，此外，半固體培養(yǎng)基篩選法采用的熒光抗體對細胞有毒性，會影響細胞活性；并且在半固體培養(yǎng)基上篩選出的高產(chǎn)細胞，轉移到懸浮培養(yǎng)系統(tǒng)可能并不高產(chǎn)。流式細胞術的分選效率高，但是由于流式細胞術分選采用的內部壓力及其高頻震蕩對細胞造成的損傷較大，分選下來的細胞活性不高。篩選過程對細胞的物理或化學損傷是造成細胞單克隆率降低的原因之一，除此之外，篩選前細胞的狀態(tài)對于篩選后是否形成高產(chǎn)的細胞群落也很重要，若是篩選前細胞狀態(tài)已經(jīng)不好，篩選后其狀態(tài)也難以變好，何況篩選過程會對細胞造成一定的損傷，更不會奢望其狀態(tài)會變好。

綜上所述，尋找一種分選效率高，篩選出的陽性克隆細胞成活率高、生長率高，且單克隆源性證據(jù)可追溯的篩選方法或技術平臺對于涉及單克隆細胞篩選的基因治療、抗體等生物醫(yī)藥行業(yè)顯得尤為重要。

德國 Cytena 公司開發(fā)的單細胞打印機（SCP）采用的芯片包含硅膜設計，電子控制的制動板輕輕擠壓腔體導致腔體體積變小，產(chǎn)生液滴，通過高分辨率的CCD相機確認只含一個細胞且該細胞直徑和細胞圓度符合設定范圍的液滴落進96/384孔板中，不含細胞的空液滴和含兩個及以上細胞的液滴被氣動閥門吸走。通過設定細胞直徑和細胞圓度的質控分選過程，不僅提高了單細胞的分選效率，也篩選到了狀態(tài)更好的細胞，提高了單克隆細胞的生長率。

圖1. Cytena 單細胞打印機工作原理圖

單細胞的證據(jù)可追溯性，在cartridge分離細胞前后的過程中，會連續(xù)拍取多張細胞圖片，證實克隆來自于單個細胞。

Cytena單細胞打印機進入國內以來，受到國內各大藥企的青睞，得到了眾多用戶的的積極反饋和認可。

具體案例分享

一、下面給出了不同地區(qū)一些客戶反饋的單細胞克隆成活率及單克隆細胞拍照圖。

圖3. 不同客戶使用Cytena單細胞打印機得到的單細胞克隆成活率數(shù)據(jù)

（1）杭州客戶

結論：SCP分選出的細胞幾乎都是單細胞，有限稀釋大部分都是空孔。SCP長出來的單克隆數(shù)（70個）幾乎是有限稀釋的4倍（18個）。

（2）南京客戶

一共分選2組樣品，在有限稀釋法分選很難生長的細胞，通過SCP分選后，都獲得了66-75個單克隆細胞株，證實SCP通過細胞直徑，細胞圓度等質控方式能篩選到狀態(tài)好的細胞，提高單克隆率。

（3）上?？蛻?/span>

（4）東北客戶

SCP的分選效率高（如下圖所示），除了周邊孔受到蒸發(fā)效應影響生長，中間的孔都是單克隆來源的細胞，且生長良好。（細胞類型：CHO細胞）

（5）成都客戶

二、客戶評價

三、部分客戶名單