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什么是血清
血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因ZI后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。
血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用
血清的成分多樣,可以給細(xì)胞提供:
1. 基本營養(yǎng)物質(zhì),如氨基酸、維生素、脂類物質(zhì)、無機物、核酸衍生物等細(xì)胞生長必需的物質(zhì);
2. 激素:胰島素、促生長激素、類固醇激素如睪酮和孕酮、腎上腺皮質(zhì)激素等。
3. 生長因子:表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、血小板生長因子、神經(jīng)細(xì)胞生長因子等;
4. 結(jié)合蛋白:結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過程中起著重要作用,它能攜帶重要地低分子量物質(zhì),如轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合鐵離子,白蛋白攜帶維生素、激素等;
5. 促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機械損傷;
6. 蛋白酶抑制劑:中和某些細(xì)胞(如內(nèi)皮細(xì)胞等)釋放的蛋白酶,從而對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護作用;
7.血清含有的一些微量元素和離子在代謝解毒中起重要作用,如SeO3,硒等;
8.血清蛋白使血清具有一定的粘度,可以保護細(xì)胞免受機械損傷,如懸浮培養(yǎng)攪拌時保護細(xì)胞。
常用的血清
目前常用的血清有胎牛血清、新生牛血清和小牛血清。
以上三種血清中胎牛血清的品質(zhì)ZUI高,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細(xì)胞有害的成分最少,因此價格也最高。
血清的使用與選擇
血清的使用濃度一般在5%~20%,常用是10%。
有些細(xì)胞需要胎牛血清才能生長,而有些細(xì)胞有小牛血清就能生長。因此,要根據(jù)具體用途與需要選擇合適的血清。
血清的儲存與解凍
1.儲存:建議將血清儲存在-5℃~-20℃(HyClone胎牛血清建議儲存在-10℃)。注意:建議不要將血清儲存在-80℃中!(因為儲存在-80℃,解凍時巨大的溫差會使血清產(chǎn)生更多的沉淀。)
2.解凍:不建議于4℃過夜解凍,也不建議直接將冷凍的血清放在37℃水浴或者溫箱中解凍,因為若血清沒有混勻,底部的蛋白會變性形成沉淀。
血清解凍的方法(三步法)如下:
注:在水浴過程中,血清要*浸入水中,同時在融化過程中要慢慢搖動瓶身混勻血清,但在搖動中盡量不要產(chǎn)生泡沫。
血清在解凍后,可以根據(jù)實驗需求分裝成單次用量,密封好后立即放回-20℃冰箱繼續(xù)儲存以供進一步使用,這樣可以有效避免反復(fù)凍融的問題。
血清出現(xiàn)沉淀或絮狀物質(zhì)的原因
1. 2-8℃長時間儲存。
2. 解凍過程中未混勻。
3. γ-輻照:不會損害血清的理化特性或細(xì)胞培養(yǎng)性能。
4. 反復(fù)凍融:使血清脂蛋白發(fā)生變性造成渾濁。
5. 血清中殘留的纖維蛋白原:殘留的纖維蛋白原在解凍后會轉(zhuǎn)化為纖維蛋白,過量的纖維蛋白在血清中表現(xiàn)為可見的絮狀物質(zhì)。
去除方法:400 g離心。不建議直接過濾血清以去除絮狀物質(zhì),因為過濾器可能會堵塞或者截留重要的蛋白質(zhì)。
6. 磷酸鈣:磷酸鈣在血清中通常呈云狀,并且在倒置顯微鏡下觀察會看到可以自由移動的小黑點,因此磷酸鈣沉淀通常被誤認(rèn)為是微生物污染物。
檢測是否污染方法:將1 mL待測血清直接倒在細(xì)菌瓊脂平板上,在37℃培養(yǎng)之后觀察菌落的生長情況。在油鏡(放大1000倍)下觀察革蘭氏染色,以確定是否受到污染。不建議用37℃孵育的血清直接檢測無菌性,因為在37℃孵育之后,血清中的磷酸鈣沉淀物會增加。
國內(nèi)購買胎牛血清的現(xiàn)狀
難辨真假,產(chǎn)地不實,有的甚至都不是牛血清。非正規(guī)胎牛血清產(chǎn)品會直接影響實驗的結(jié)果和穩(wěn)定以及數(shù)據(jù)的真實性,對實驗造成很大的影響。因此,購買血清產(chǎn)品時一定要選擇可靠的產(chǎn)品!
北京百奧創(chuàng)新科技有限公司提供來源可靠,產(chǎn)地可查的HyClone、Omnimabs以及澳申生物的血清產(chǎn)品。
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2.采用一次性生產(chǎn)設(shè)施,*消除了交叉污染的風(fēng)險;
3.最大的批處理能力,降低批間差異造成的影響;
4.完整的來源地可追溯性;
5.低抗體含量,高生長因子;
6. OritainTM天然品指紋識別技術(shù);
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1. 合法進口于無瘋牛病疫區(qū),具有合法的進口批文、海關(guān)證明以及檢驗檢疫證明;
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3.采血點集中,生產(chǎn)工藝先進,批次穩(wěn)定;
4.符合GMP車間要求,滿足工業(yè)客戶的需要。
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1.國家批準(zhǔn)的血源地,血清均可追溯源頭,一瓶一碼;
2.國際先JIN生產(chǎn)工藝:3級0.1 μm過濾,標(biāo)準(zhǔn)凈化車間,萬級環(huán)境下罐裝,全程低溫控制系統(tǒng);
3.國內(nèi)雙重質(zhì)檢,全面理化、微生物檢測,不含BVD\PI3\IBR\RABV\BAV BRSV\BTV等牛病病毒。
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